apoA5與脂聯(lián)素等相關(guān)因素關(guān)系及其調(diào)控TG代謝的機制研究.pdf

1、第一部分:不同糖耐量人群血漿apoA5與脂聯(lián)素及其相關(guān)因素的關(guān)系
　　目的：探討不同糖耐量人群血漿載脂蛋白A5(apolipoproteinA5，apoA5)與脂聯(lián)素(adiponectin，APN)、TG、胰島素抵抗(insulinresistance，IR)的關(guān)系，及其降低TG的可能機制。
　　方法：選取35例新診斷的2型糖尿病患者(T2DM組)，30例糖調(diào)節(jié)受損者(IGR組)，35例正常對照(NGT組)，行口服葡萄糖耐

2、量試驗(oralglucose tolerance test，OVGTT)，ELISA法測定空腹apoA5、APN水平，比色法測定游離脂肪酸(free fatty acid，F(xiàn)FA)。用穩(wěn)態(tài)模型來評價胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)及胰島β細胞功能(HOMA-B)。探討apoA5與APN、血脂、FFA、HOMA-IR及HOMA-B的關(guān)系。
　　結(jié)果：①T2DM組、IGR組的apoA5、APN顯著低于NGT組(P<0.05)，T2D

3、M組較IGR組降低更顯著(P<0.05)。②T2DM組、IGR組的TG、FFA、2hFFA、LDL-C、FPG、2hPG、FINS、HOMA-IR、BMI、WHR水平顯著高于NGT組(P<0.05)，T2DM組較IGR組升高更顯著(P<0.05)。③apoA5與TG、FFA、2hFFA、LDL-C、FPG、2hPG、FINS、HOMA-IR、BMI、WHR均呈負相關(guān)，與APN、HDL-C、HOMA-B均呈正相關(guān)。④多元逐步回歸分析顯示：

4、APN、TG、FFA、WHR、HOMA-IR是apoA5的獨立影響因素。
　　結(jié)論：低血漿apoA5、APN水平，可能是糖調(diào)節(jié)受損、T2DM發(fā)生高甘油三酯(hypertrigIyceridemia，HTG)血癥的早期敏感指標；apoA5、APN降低血中TG水平，可能是通過抑制FFA來實現(xiàn)的；低水平的apoA5和APN可能相互協(xié)同地參與了從NGT→IGR→T2DM的發(fā)生、發(fā)展。
　　第二部分:不同糖耐量人群血漿apoA5與胰島

5、β細胞第一時相胰島素分泌關(guān)系
　　目的：探討不同糖耐量人群血漿載脂蛋白A5(apolipoproteinA5，apoA5)與胰島β細胞第一時相胰島素分泌的關(guān)系。
　　方法：選取35例新診斷的2型糖尿病患者(T2DM組)，30例糖耐量降低者(IGR組)，35例正常對照(NGT組)。行靜脈葡萄糖耐量試驗(intravenous glucose tolerance test，IVGTT)，以葡萄糖刺激后3到5分鐘急性胰島素反應(3

6、-5minutes acute insulin response，AIR3-5)來反映第一時相的胰島素分泌功能；ELISA法測定空腹血漿apoA5水平，比色法測定空腹血漿游離脂肪酸(FFA)及糖負荷后2小時FFA(2h FFA)水平；用穩(wěn)態(tài)模型來評價胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)及胰島β細胞功能(HOMA-β)。探討apoA5與AIR3-5、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(

7、LDL-C)、總膽固醇(TC)、FPG、2hPG、HOMA-B及HOMA-IR的關(guān)系。
　　結(jié)果：①T2DM組、IGR組的apoA5、AIR3-5、HDL-C、HOMA-B顯著低于NGT組(P<0.05)，T2DM組顯著低于IGR組(P<0.05)；②T2DM組、IGR組TG、FFA、2hFFA、LDL-C、FPG、2hPG、FINS、BMI、WHR和HOMA-IR明顯高于NGT組(P<0.05)，T2DM組顯著高于IGR組(P<

8、0.05)；③apoA5與AIR3-5、HOMA-B、HDL-C均呈正相關(guān)，與TG、FFA、2hFFA、LDL-C、FPG、2hPG、FINS、HOMA-IR、BMI、WHR均呈負相關(guān)；④多元逐步回歸分析顯示，AIR3-5、TG、FFA、WHR、HOMA-IR是apoA5的獨立影響因素。
　　結(jié)論：從NGT→IGR→T2DM發(fā)病進程中，血漿中apoA5水平逐漸降低，低apoA5血癥可能通過升高血漿中FFA而導致HTG血癥發(fā)生，加重

9、IR，而使胰島β細胞第一時相胰島素分泌受損，故推測升高血漿中apoA5水平，可能會降低：FFA、TG水平，減輕脂毒性，從而改善、恢復第一時相胰島素分泌，防治和延緩糖調(diào)節(jié)受損、T2DM的發(fā)生、發(fā)展。
　　第三部分:脂聯(lián)素對HepG2細胞apoA5表達、TG水平影響及其機制初步探討
　　目的：揭示脂聯(lián)素與載脂蛋白A5(Apolipoprotein A5，apoA5)在調(diào)控HepG2細胞內(nèi)甘油三酯(triglyceride，TG)

10、代謝中的關(guān)系，旨在初步探討脂聯(lián)素調(diào)控TG代謝的可能機制。
　　方法：(1)濃度依賴實驗：用不同濃度脂聯(lián)素(0、12.5、25、50μ g/mL)作用HepG2細胞24小時，比較分析肝細胞內(nèi)過氧化物酶體增殖物激活受體-a(Peroxisome proliferator-activated receptor，PPAR-a)、apoA5基因、蛋白表達水平及TG含量；(2)時間依賴實驗：選取25μ g/mL脂聯(lián)素作用不同時間點(0h、6h

11、、12h、24h、36h、48h)，比較分析肝細胞內(nèi)PPAR-a、apoA5基因、蛋白表達水平及TG含量；(3)MK886干預實驗：將HepG2細胞分為：①對照組；②溶劑組；③MK886組；④脂聯(lián)素組；⑤脂聯(lián)素+MK886組，分別檢測各組肝細胞內(nèi)PPAR-a、apoA5基因、蛋白表達水平及TG含量。
　　結(jié)果：(1)濃度依賴實驗顯示：A：肝細胞內(nèi)PPAR-a、apoA5基因及蛋白表達水平隨著脂聯(lián)素濃度增加而增加，呈濃度依賴趨勢，當

12、脂聯(lián)素濃度達到25μ g/mL時，其基因、蛋白表達量均達到最大(P<0.01)，與濃度為50μ g/mL相比無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；B：而肝細胞內(nèi)TG含量隨著脂聯(lián)素濃度增加而降低，當脂聯(lián)素濃度達到25μ g/mL時，其TG含量降到最低(P<0.01)，與濃度為50μ g/mL相比無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；(2)時間依賴實驗顯示：A：肝細胞內(nèi)：PPAR-a、apoA5基因及蛋白表達水平在0-24h之內(nèi)隨著脂聯(lián)素作用時間增加而增加

13、，當作用時間達到24h時，PPAR-a、apoA5基因及蛋白表達水平均達到最大(P<0.01)，當達到36h時表達量開始下降，達到48h時下降更明顯，但均高于空白對照組(P<0.01)；B：肝細胞內(nèi)TG含量在0-24h之內(nèi)隨著脂聯(lián)素作用時間增加而降低，當作用時間達到24h時，細胞內(nèi)TG含量下降最明顯(P<0.01)，當達到36h時細胞內(nèi)TG含量開始升高，達到48h時升高更明顯，但均低于空白對照組(P<0.01)；(3)MK886干預實驗

14、顯示：A：對照組、溶劑組、脂聯(lián)素+MK886組組間比較，PPAR-a、apoA5基因及蛋白TG含量差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；B：MK886組與對照組、溶劑組、脂聯(lián)素+MK886組中任一組比較，PPAR-a、apoA5基因及蛋白含量明顯降低(P<0.01)，而TG含量明顯升高(P<0.05)；C：脂聯(lián)素組與對照組、溶劑組、脂聯(lián)素+MK886組中任一組比較，PPAR-a、apoA5基因及蛋白含量明顯升高(P<0.01)，而TG含量