產(chǎn)米渣蛋白水解酶菌株的篩選、鑒定、發(fā)酵條件優(yōu)化及酶活穩(wěn)定性研究.pdf

1、本論文目的是篩選產(chǎn)米渣蛋白水解酶菌株，用其全細(xì)胞直接用于米渣蛋白的水解，以促進(jìn)米渣的綠色開發(fā)及充分利用。研究內(nèi)容包括產(chǎn)米渣蛋白水解酶菌株的篩選和鑒定，產(chǎn)米渣蛋白水解酶菌株水解米渣條件優(yōu)化及其酶活穩(wěn)定性研究。
　　利用蛋白酶水解酪蛋白原理從富含蛋白樣品篩選到116株能產(chǎn)生蛋白酶的菌株。篩選到得菌株，以米渣為唯一碳源和氮源經(jīng)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，再次復(fù)篩分析它們所產(chǎn)的粗蛋白酶，最后從豆豉和臘腸樣品中得到2株產(chǎn)酶的目標(biāo)菌株，即HP60和HP90

2、，其粗酶活分別為263±7U/mL和354±1.5U/mL，對(duì)米渣蛋白水解度分別為15.63±0.30％和19.83±0.47%。該兩株菌株經(jīng)形態(tài)學(xué)、生理生化特征（API20 NE, Biolog GP；API20NE and API50 CH）、16S rRNA及持家基因recA序列分析分類鑒定為解淀粉芽孢桿菌（HP60）和枯草芽孢桿菌（HP90）。
　　以篩選的解淀粉芽孢桿菌（CCTCC NO. M2014200）和枯草芽孢桿

3、菌（CCTCC No. M2014201）為出發(fā)菌株，在單因素的基礎(chǔ)上，菌株HP60和HP90分別進(jìn)行正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)和響應(yīng)面設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)化了它們水解米渣蛋白的培養(yǎng)條件。菌株HP60采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)確定了各影響因素的最佳值，以提高菌株HP60對(duì)米渣蛋白的水解度。所得最佳各影響因素為：pH7，發(fā)酵時(shí)間66 h，接種量9%，米渣濃度1g/100mL，在此條件下，菌株HP60所得米渣蛋白水解度為19.20%，與優(yōu)化前相比提高了23%。響應(yīng)面設(shè)計(jì)試驗(yàn)

4、確定菌株HP90水解米渣蛋白的最終優(yōu)化結(jié)果為：發(fā)酵液的pH為7.35、發(fā)酵時(shí)間為60 h、接種量為7%、米渣濃度為0.97g/100mL時(shí)，響應(yīng)值水解度達(dá)到最大值為28.23%，與優(yōu)化前相比提高了42%。
　　對(duì)菌株HP60和HP90的發(fā)酵上清粗酶液進(jìn)行酶活穩(wěn)定性探索，考察了pH、溫度、金屬離子（Ca2+、Mg2+、Cu2+）分別對(duì)菌株HP60和HP90酶活的影響，結(jié)果顯示兩株菌株分別在溫度20℃～40℃和pH6～8都具有很好的酶