殼寡糖的酶法制備分析及其初步分離.pdf

1、殼聚糖有豐富的資源,在食品、醫(yī)藥、環(huán)保領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用,但殼聚糖的分子量大、水溶性差,限制了它的應(yīng)用。殼寡糖是其降解產(chǎn)物,它不但保留了殼聚糖的某些功能特性,還有良好的水溶性等特點(diǎn),更具有應(yīng)用價(jià)值。酶法降解是廣泛使用的降解方法,可選擇特異性的切斷β-1,4糖苷鍵,反應(yīng)條件溫和、過程易控制,可通過條件的控制得到不同分子量范圍的殼寡糖。
　　 本課題以實(shí)驗(yàn)室保藏的一株產(chǎn)殼聚糖酶菌株Mitsuaria sp.141-2為研究對象,主要圍

2、繞酶法降解殼聚糖的方向展開工作,首先對菌株產(chǎn)酶的發(fā)酵階段進(jìn)行優(yōu)化來提高酶活,繼而對該酶降解殼聚糖底物的條件進(jìn)行優(yōu)化,然后對酶解產(chǎn)物進(jìn)行了分析檢測,最后對酶解產(chǎn)物進(jìn)行初步的分離純化。具體研究結(jié)果如下:
　　 1、采用菌體富集和誘導(dǎo)產(chǎn)酶兩步法對菌株發(fā)酵階段進(jìn)行優(yōu)化,菌體富集階段優(yōu)化后的培養(yǎng)條件為:2.5％葡萄糖,0.9％蛋白胨,0.14％K2HPO4,0.06％KH2PO4,0.1％MgSO4,180 mL/1000 mL,30℃,

3、180 rpm；優(yōu)化后的誘導(dǎo)條件為:1.5％的殼聚糖底物誘導(dǎo)3 d。最終,菌濃度是起始條件的3倍,酶活由最初的3.5 U/mL提高到了6.1 U/mL。
　　 2、采用單因素實(shí)驗(yàn)對酶解條件進(jìn)行了優(yōu)化。最適條件為:底物濃度3％,pH5.2～5.6,溫度65℃,加酶量7 U/g殼聚糖。該酶適合降解脫乙酰度居中(85％左右)的殼聚糖。
　　 3、對酶解產(chǎn)物進(jìn)行了分析檢測。通過水解產(chǎn)物的TLC圖和平均聚合度聯(lián)系可得,該酶主要以內(nèi)