基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制因子-1與多器官功能障礙綜合征發(fā)病關(guān)系研究.pdf

1、目的：通過檢測多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)動物模型外周血及肺、肝、腎組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-9( matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及其抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1, TIMP-1)的表達變化，研究它們與MODS發(fā)生的關(guān)系。同時觀察嚴重膿毒癥患者血漿MMP-9和TI

2、MP-1的濃度變化，研究它們對于評估膿毒癥誘發(fā)MODS的臨床應用價值。
　　方法：(1)成年雄性SD大鼠50只,隨機分為假手術(shù)(Sham)對照組8只、盲腸結(jié)扎穿孔(cecal ligation plus puncture,CLP)模型組42只,CLP組又分為6小時、12小時、24小時和48小時4個時相亞組,最終用于實驗者 Sham組8只、CLP6小時組8只、CLP12小時組8只、CLP24小時組8只、CLP48小時組8只,造模后在

3、不同時相處死搜集標本。(2)檢測大鼠CLP后肺、肝、腎功能變化。(3)光鏡觀察肺、肝、腎組織在不同時相的結(jié)構(gòu)變化。(4)酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunoadsordent assay, ELISA)檢測血清 MMP-9和TIMP-1濃度,并計算MMP-9/TIMP-1比值。(5)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測各

4、組織中MMP-9、TIMP-1 mRNA的表達。(6)免疫組化檢測各組織中IV型膠原(collagen IV,IV-C)的表達量。(7)ELISA法檢測43例重癥監(jiān)護病房中(intensive care unit,ICU)嚴重膿毒癥患者血漿中MMP-9和TIMP-1濃度的動態(tài)變化,計算MMP-9/TIMP-1比值,選擇18例同期健康體檢者為對照。
　　結(jié)果:(1)與Sham組相比,大鼠CLP后肺、肝、腎功能均有不同程度的損傷。(2

5、)與 Sham組相比，大鼠CLP后組織均顯示不同程度的水腫、充血、炎癥細胞浸潤。(3)與Sham組相比，大鼠CLP后血清MMP-9和TIMP-1濃度明顯升高(P＜0.01-0.05),峰值見于24小時(P＜0.01),MMP-9/TIMP-1比值在 CLP12小時后明顯升高(P＜0.01)。(4)與 Sham組相比,大鼠CLP后肺、肝、腎組織中MMP-9和TIMP-1 mRNA的表達量6小時即有所增加,12-48小時均有不同程度的升高(

6、P＜0.01-0.05)。(5)與 Sham組相比,大鼠CLP后12-48小時,肺和肝組織中IV-C的陽性表達有不同程度的減少(P＜0.01-0.05),24-48小時腎組織中IV-C的陽性表達有不同程度的減少(P＜0.01-0.05)。(6)與對照組比較,嚴重膿毒癥患者血漿 MMP-9和TIMP-1濃度均顯著升高(P＜0.01),MMP-9/TIMP-1比值顯著升高(P＜0.01);發(fā)生 MODS患者血漿MMP-9和TIMP-1濃度均

7、顯著高于非 MODS者(P＜0.01),1、3、5天 MMP-9/TIMP-1比值高于非 MODS者(P＜0.01-0.05);MODS死亡亞組血漿 MMP-9和TIMP-1濃度均顯著高于存活亞組(P＜0.01),MMP-9/TIMP-1比值沒有明顯差別。
　　結(jié)論:(1)機體在遭受嚴重感染打擊后,MMP-9和TIMP-1表達同時升高,但以MMP-9升高為主,導致MMP-9/TIMP-1比例失調(diào),細胞外基質(zhì)的過度降解,可能造成血管