酸堿金納米簇制備及其蛋白酶檢測(cè)應(yīng)用.pdf

1、熒光金屬納米簇是一類介于原子與納米顆粒之間的材料，由幾十至一百個(gè)原子組成的納米簇，其尺寸接近電子的費(fèi)米波長(zhǎng)，因此具有電子的離散能及和由尺寸決定的熒光性質(zhì)。由于熒光金屬納米簇具有超小尺寸、良好的生物相容性和熒光穩(wěn)定性，成為一類理想的熒光標(biāo)記物及生物檢測(cè)探針。本文重點(diǎn)開(kāi)展基于蛋白包覆、穩(wěn)定與還原的金納米簇制備及其蛋白酶檢測(cè)應(yīng)用，主要研究結(jié)論如下：
　?。?）pH調(diào)控金納米簇形成：重點(diǎn)考察了pH、反應(yīng)時(shí)間等對(duì)納米簇尺寸與熒光性質(zhì)的影響規(guī)

2、律，并分析它們對(duì)已形成的納米簇的調(diào)控行為。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，將體系 pH升至11以后，熒光納米簇尺寸逐漸增大，熒光發(fā)射光譜也由藍(lán)色逐漸向紅色轉(zhuǎn)移。對(duì)于紅色熒光納米簇，當(dāng)體系的pH調(diào)節(jié)成酸性后，其熒光強(qiáng)度逐漸下降。該結(jié)果有助于理解金納米簇的結(jié)構(gòu)和形成機(jī)理，也可應(yīng)用于金納米簇的調(diào)控制備中。
　?。?）基于酸性熒光金納米簇的胃蛋白酶檢測(cè)：胃蛋白酶是生物體內(nèi)可在酸性條件下具有消化活性的酶，已廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)中制備生物活性肽。本文設(shè)計(jì)了一種簡(jiǎn)

3、單的、基于酶剪切活性的胃蛋白酶檢測(cè)方法，通過(guò)胃蛋白酶的剪切，使溶菌酶穩(wěn)定的金納米簇?zé)晒饨档?。在酸性條件下檢測(cè)，不僅保證了金納米簇的熒光強(qiáng)度，還保證了胃蛋白酶額最大活性。實(shí)驗(yàn)證明，胃蛋白酶檢測(cè)的線性區(qū)間為1-100μg/mL，檢測(cè)限達(dá)到0.6 ng/mL。
　?。?）基于堿性熒光金納米簇的堿性蛋白酶檢測(cè)：堿性蛋白酶是一類在生化、食品、制藥、洗滌業(yè)等行業(yè)中應(yīng)用很廣的蛋白酶。本文設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)了一種在堿性條件下形成并穩(wěn)定的熒光金納米簇，并利用

4、它實(shí)現(xiàn)對(duì)堿性蛋白酶的靈敏檢測(cè)。其檢測(cè)原理是堿性蛋白酶將穩(wěn)定和包覆金納米簇的溶菌酶進(jìn)行水解，造成金納米簇的熒光下降，再關(guān)聯(lián)熒光下降程度與堿性蛋白酶濃度的關(guān)系，便可實(shí)現(xiàn)對(duì)堿性蛋白酶的檢測(cè)。研究了金納米簇與堿性蛋白酶溶液體積比，反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間對(duì)檢測(cè)靈敏性的影響。結(jié)果表明：在金納米簇與堿性蛋白酶溶液體積比為1:9，反應(yīng)溫度為40℃，反應(yīng)時(shí)間為3小時(shí)的條件下，檢測(cè)效果最好。該檢測(cè)方法的線性范圍可達(dá)2-2000μg/mL（即酶活檢測(cè)范圍為4×1