無鎳鈷鉻合金的體外細(xì)胞相容性研究.pdf

1、目的:
　　通過細(xì)胞毒性檢測及細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)評價新型無鎳鈷鉻合金對L929成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，為其在口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用提供生物學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　將新型無鎳鈷鉻合金及L605鈷鉻合金依次用400目、600目、1000目、2000目、3000目砂紙打磨拋光。本實(shí)驗(yàn)分組情況為:陰性對照組、無鎳鈷鉻合金組、L605鈷鉻合金組及純鉛組（陽性對照組）。按國標(biāo)ISO10993-5樣品浸提液制備標(biāo)準(zhǔn)制備無鎳鈷鉻合金、L6

2、05鈷鉻合金及純鉛浸提液。采用RPMI1640培養(yǎng)基對L929成纖維細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后，分別加入三種浸提液作用于L929細(xì)胞24小時、48小時、72小時。通過倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)并分別于三個時間點(diǎn)拍照;采用WST-1細(xì)胞毒性檢測法評價三種材料對L929成纖維細(xì)胞增殖的影響，通過酶標(biāo)儀檢測結(jié)果（OD值）計算細(xì)胞相對增殖率并判斷細(xì)胞毒性等級;采用AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法通過流式細(xì)胞儀評價實(shí)驗(yàn)材料對L92

3、9細(xì)胞凋亡情況的影響。
　　結(jié)果:
　　細(xì)胞形態(tài)觀察結(jié)果:在24小時、48小時、72小時三個時間點(diǎn)，陰性對照組、無鎳鈷鉻合金組、L605鈷鉻合金組浸提液作用下的L929成纖維細(xì)胞均表現(xiàn)出良好的生長狀態(tài)。細(xì)胞走向?yàn)樾郎u狀或放射火焰狀，細(xì)胞輪廓呈清晰的長梭形或多角形，細(xì)胞貼壁良好、胞膜完整、胞質(zhì)豐富，隨著培養(yǎng)時間延長細(xì)胞數(shù)量逐漸增多。陽性對照組細(xì)胞生長緩慢，細(xì)胞體積縮小、胞核固縮、胞質(zhì)濃縮深染，鏡下可見較多的圓形死細(xì)胞漂浮于培養(yǎng)

4、基上。
　　WST-1細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果:將各組材料浸提液作用下的細(xì)胞存活率進(jìn)行比較:陰性對照組＞無鎳鈷鉻合金組＞ L605鈷鉻合金組＞陽性對照組，無鎳鈷鉻合金組分別與陰性對照組、L605鈷鉻合金組、陽性對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。依據(jù)美國藥典(United States Pharmacopeia)進(jìn)行細(xì)胞毒性等級評價，結(jié)果如下:陰性對照組及無鎳鈷鉻合金組在24小時、48小時、72小時均無細(xì)胞毒性。L605鈷鉻合金

5、組在浸提液作用24小時、48小時后細(xì)胞毒性均為1級，表現(xiàn)為無細(xì)胞毒性;72小時后顯示出輕微的細(xì)胞毒性，細(xì)胞毒性為2級。陽性對照組細(xì)胞在鉛浸提液作用24小時后，細(xì)胞毒性為2級;48小時后細(xì)胞毒性為3級呈中等程度細(xì)胞毒性，72小時細(xì)胞毒性為4級，表現(xiàn)為明顯的細(xì)胞毒性。
　　AnnexinⅤ-FITC/PI細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果:各組合金浸提液作用下的L929細(xì)胞早期凋亡率按陰性對照組、無鎳鈷鉻合金組、L605鈷鉻合金組的順序依次遞增，其數(shù)值