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文檔簡介
1、聯(lián)合生物加工過程是一種將酶表達、纖維素糖化、乙醇發(fā)酵在一個反應器中進行的高度集成生物煉制過程，但并沒有天然微生物可以適用于此過程直接進行纖維素乙醇發(fā)酵。本文利用基因重組技術(shù)，在釀酒酵母細胞表面展示包含內(nèi)切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶的雙支架微型纖維小體，同時在胞內(nèi)異源表達包含纖維糊精轉(zhuǎn)運蛋白和β-葡萄糖苷酶的纖維糊精代謝途徑，使得重組釀酒酵母可以降解利用纖維素并與半乳糖進行混糖發(fā)酵，該降解機制模擬了熱纖梭菌利用纖維素的模式。
1、在
2、釀酒酵母中異源表達纖維糊精代謝途徑、優(yōu)化篩選β-葡萄糖苷酶，并對纖維糊精轉(zhuǎn)運蛋白與β-葡萄糖菅酶進行定位表征。
2、N-端分泌信號肽α-factor可以促進綠色熒光蛋白GFP與表面展示的Ⅱ型支架形成復合體，并提高釀酒酵母細胞表面展示量～30％。
3、利用重組釀酒酵母表面展示纖維小體，篩選出針對不同纖維素乙醇產(chǎn)量較高的三種內(nèi)切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶組合:Eng Y-cbhB、celCCA-CA_ C0911、celCC
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