早實識模式轉化體系建立及基因工程創(chuàng)造柑橘無核新種質.pdf

1、華中農業(yè)大學博士學位論文早實識模式轉化體系建立及基因工程創(chuàng)造柑橘無核新種質姓名：譚彬申請學位級別：博士專業(yè)：果樹學指導教師：郭文武200904華中農業(yè)大學博士學位論文個，再生芽經G U S 染色、P C R 分析鑒定為陽性，S o u t h e r nb l o t 結果表明所檢測的3個轉化株系中M A C l 2 ．2 基因以單拷貝插入。4 ．默科特橘橙成年態(tài)材料的滅菌及再生體系優(yōu)化。不同消毒方法和不同消毒劑濃度對成年態(tài)材料的滅菌效

2、果不同，其中以2 ．5 ％的次氯酸鈉二次消毒法處理默科特橘橙成年態(tài)莖段綜合效果最好；不同培養(yǎng)基對成年態(tài)莖段再生影響分析表明，不同配方對不定芽和不定根誘導能力不同，其中不定芽再生最佳配方為M T + 2 ．0m g ／LB A + 0 ．1m g ／L N A A ，不定根再生最佳配方為1 ／2M T d - O ．1 m g ／L B A + O ．5 g ／LA C d -0 ．2 5m g ／L N A A 。5 ．默科特橘橙上胚軸

3、切段再生及遺傳轉化。1 ) 激素B A 對默科特橘橙上胚軸切段不定芽的誘導起決定作用，而一定濃度的I A A 對不定芽的誘導起協同作用；當B A 濃度為1 ．0m g ／L 、I A A 濃度為0 ．2m g ／L 時，外植體再生的不定芽總數和‘壯芽數’均達到最多；同時不定芽再生不定根的最佳配方為1 ／2M T 4 - 0 ．1m g ／L I B A + 0 ．5g ／LA C + 0 ．5m g ／LN A A 。2 ) 利用已建立

4、的默科特橘橙上胚軸切段的再生體系進行C G l ．4 0 0 - R N a s e 基因的轉化，轉化率為0 ．9 3 ％，獲得5 株轉化C G l —4 0 0 - R N a s e 基因的P C R 陽性植株；轉基因植株生長正常，與未轉基因對照相比沒有明顯差異；其中3 株經S o u t h e r n b l o t 分析表明，外源基因以雙拷貝形式插入。6 ．其它有核品種的上胚軸切段轉化C G I ．4 0 0 - R N a

5、s e 基因。1 ) 錦橙上胚軸切段的轉化：轉化率為3 ．9 4 ％，獲得l l 株轉化C G l ．4 0 0 - R N a s e 基因的初次P C R 檢測陽性植株；1 1 株轉化植株經多次P C R 分析，表明有8 株擴增出目標條帶；經S o u t h e r nb l o t 分析，外源基因以單拷貝形式插入，而多次P C R 檢測呈陰性的轉基因株系J 3和J 9 沒有雜交信號，表明S o u t h e r n b l o

6、 t 是鑒定外源基因整合到植物基因組的最有效和最可靠的方法。2 ) 紅江橙和桃葉橙上胚軸切段的轉化：轉化率分別為1 ．3 8 ％和0 ．3 2 ％，分別獲得3 株紅江橙和1 株桃葉橙P C R 檢測陽性植株，表明相同柑橘種類中的不同基因型，其轉化率也各不相同。本文還對擬南芥M A C l 2 ．2 基因在早實枳花器官和果實發(fā)育過程中的功能，短童期種質早實枳在柑橘基因功能驗證和基因組學研究中的應用前景，提高農桿菌介導的柑橘遺傳轉化率的方法