TEKT3、SMCP與特發(fā)性弱精子癥關(guān)系的研究.pdf

1、背景與目的:近年來，不孕不育癥的患病率呈逐年增長趨勢，不孕不育已是一個遍及全球的生殖健康問題。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的研究報道，全世界夫婦中不孕不育的比例達到10％~15%，在不孕不育癥夫婦當中，男方不育所引起的占50%。因此，評估男性生育力與不育癥診斷及有效治療男性不育之間的聯(lián)系，對男性生殖健康具有重要的臨床意義。
　　男性不育由于精液質(zhì)量異常問題所導致的原因有許多，低下的精子活動力是重要的原因之一，臨床上稱之為弱精子癥（AZS）。精

2、子活力主要是指精子的前向運動能力。根據(jù)最新世界衛(wèi)生組織(WHO)第五版精液分析手冊標準，臨床對精液標本進行分析時，弱精子癥精液參考區(qū)間：精子前向運動（PR）<32%，精子濃度≥15×106ml-1。由于弱精子癥發(fā)病機制尚未研究透徹，因此，深入探究弱精子癥的發(fā)病及其發(fā)展機制，對弱精子癥治療具有重要的意義。
　　弱精子癥的發(fā)病機制主要有：信號傳導通路異常、線粒體能量代謝異常、精子尾部結(jié)構(gòu)及生理功能異常等。哺乳動物成熟的精子主要由頭部和

3、尾部構(gòu)成，精子尾部又稱鞭毛。精子尾部主要包括四部分：頸段、中段、主段、末段，每一部分都對精子的運動起著至關(guān)重要的作用。精子尾部中段主要包含三部分：軸絲微管，外周的致密纖維，線粒體鞘。
　　研究報道，目前男性不育的發(fā)生發(fā)展相關(guān)的精子基因數(shù)目已超過300個。為進一步闡明弱精子癥的發(fā)病機制，本研究通過利用兩種試驗方法：逆轉(zhuǎn)錄-多聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)、Western blot蛋白免疫印跡技術(shù)對弱精子癥患者和正常男性精子中TEKT

4、3和SMCP的表達情況進行檢測，探討TKET3和SMCP對特發(fā)性弱精子癥發(fā)病的作用，為弱精子癥的深入研究與探索其機制提供理論基礎(chǔ)，為弱精子癥（AZS）發(fā)病機制的進一步闡明和臨床弱精子癥的治療提供實驗依據(jù)。
　　材料和方法:
　　1.研究對象:收集2014年6月至10月就診于鄭州大學第三附屬醫(yī)院男科門診的50份弱精子癥患者（年齡23-39歲）和50份同一時期人類精子庫合格供精者（年齡20-40歲）精液標本。受試者采集精液前禁欲

5、3~7天，手淫方式排精于取精杯中，待精液完全液化，按照WHO第五版《精液實驗室分析手冊》對精液標本進行分析，計算機輔助精液分析儀對同一份標本連續(xù)檢測三次。所有受試對象納入標準：①無傳染病史;②無性功能障礙;③無家族遺傳病史;④內(nèi)分泌各項激素及肝腎功能檢查正常。
　　2.方法
　　2.1 RT-PCR:利用RT-PCR方法，檢測弱精子癥患者與正常對照組男性精子TEKT3 mRNA和SMCP mRNA的表達水平情況。
　　

6、2.2 Western blot蛋白印跡:利用Western-blot蛋白印跡方法，檢測弱精子癥患者與正常對照組男性精子TEKT3蛋白和SMCP蛋白的表達水平情況。
　　3.統(tǒng)計學處理:采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，結(jié)果中計量的資料數(shù)據(jù)以?x±s表示。特發(fā)性弱精子癥患者組與正常對照男性組TEKT3、SMCP mRNA和蛋白相對表達水平之間的比較，統(tǒng)計方法采用兩獨立樣本的t-檢驗進行分析，Pearson相關(guān)系數(shù)(r

7、)用來描述TEKT3、SMCP表達與精子前向運動能力的相關(guān)性，檢驗水準α＝0.05。
　　結(jié)果:
　　1.TEKT3 mRNA在兩組精子中的表達情況:兩組精子中TEKT3mRNA相對表達量分別為：0.82±0.03、0.60±0.13，弱精子癥患者與正常對照組相比，特發(fā)性弱精子癥患者精子中TEKT3mRNA的表達顯著降低。
　　2.TEKT3蛋白在兩組精子中的表達情況:兩組精子中TEKT3蛋白的相對表達量分別為：0.7

8、8±0.03、0.57±0.12，弱精子癥患者與正常對照組相比，特發(fā)性弱精子癥患者精子中TEKT3蛋白的表達呈顯著降低。
　　3.SMCP mRNA在兩組精子中的表達情況:SMCPmRNA在兩組精子中的相對表達量分別為：0.93±0.44、0.27±0.11，比較兩組精子中 SMCPmRNA相對表達量，發(fā)現(xiàn)特發(fā)性弱精子癥組精子中SMCPmRNA的表達呈顯著降低。
　　4.SMCP蛋白在兩組精子中的表達情況:SMCP蛋白在兩組

9、精子中的相對表達量分別為：1.02±0.27、0.59±0.23，比較兩組精子中 SMCP蛋白的相對表達量，發(fā)現(xiàn)特發(fā)性弱精子癥組精子中 SMCP蛋白的表達表達顯著降低。
　　5.TEKT3、SMCP在精子中表達水平與精子前向運動的相關(guān)性:精子前向運動能力和TEKT3表達水平和SMCP表達水平分別具有相關(guān)性。
　　結(jié)論:在特發(fā)性弱精子癥患者精子中，TEKT3、SMCP的表達水平與精子活力正相關(guān)，兩者的低表達與精子前向運動能力降