mtDNA(線粒體DNA)與原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥關系及其氧化損傷機制的初步研究.pdf

1、目的：
　　1.從反映mtDNA“質(zhì)變”、“量變”的缺失率、拷貝數(shù)著手，探討原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥與mtDNA的相關性。
　　2.對骨質(zhì)疏松組與非骨質(zhì)疏松組血清行8-OHdG濃度檢測，探討血清8-OHdG在兩組患者中的變化情況，以進一步證明氧化損傷在骨質(zhì)疏松癥發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　3.進一步探討患者mtDNA缺失和拷貝數(shù)變化與8-OHdG的關系。
　　方法：
　　1.自2011年7月-2012年1月，作者從廣州

2、醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學附屬骨傷科醫(yī)院住院患者中嚴格按照納入標準和排除標準隨機選取患者58名，根據(jù)患者的病情需要行骨密度檢測，并參照骨密度檢查結(jié)果，分為骨質(zhì)疏松組（實驗組）40名與非骨質(zhì)疏松組(對照組)18名；其中所有患者均行腰椎（L1-4）骨密度檢測，而同時行左右股骨骨密度檢測的患者45名（實驗組27名，對照組18名）；上述58名患者中行腰椎手術19例，實驗組10例，對照組9例；對上述58名患者、19例手術患者分別留存外周血

3、、骨組織。
　　2.對58名患者的外周血、19例手術患者留存骨組織行普通 PCR定性檢測4.9kb（4977bp）、3.7kb片段缺失，實時熒光定量PCR檢測mtDNA拷貝數(shù)。另外對58名患者的外周血血清Elisa行血清8-OHdG檢測。
　　3.統(tǒng)計學分析4.9kb（4977bp）及3.7kb片段缺失、拷貝數(shù)、8-OHdG三個指標之間的相關性及與其他相應參數(shù)的相關性；并對原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的獨立危險因素進行評估。
　　

4、結(jié)果：
　　1.本研究納入的58名患者，其中實驗組40名，對照組18名，兩組患者在腰椎（L1-4）BMD、T值均有統(tǒng)計學差異（p<0.01）；其中45名患者（實驗組27名，對照組18名）行左右股骨骨密度檢測，兩組患者在左右股骨BMD、T值亦均有統(tǒng)計學差異（p<0.01）；所有患者在年齡、身高、體重、BMI差異無統(tǒng)計學意義（p均>0.05）,而在性別上兩組患者差異有統(tǒng)計學差異（p<0.05）。
　　2.所有患者外周血、19例腰

5、椎手術患者骨組織中均未發(fā)現(xiàn)mtDNA4.9kb（4977bp）、3.7kb片段缺失。
　　3.采用2-ΔΔCT的計算法統(tǒng)計所有患者（58名）mtDNA拷貝數(shù)相對對照樣本(選取對照組中一年齡較大且同時行腰椎手術的患者的血樣本作為對照樣本)的倍數(shù)；Spearman相關分析示19例腰椎手術外周血及骨組織mtDNA拷貝數(shù)具有很好的相關性(r=0.710,p=0.001)；Spearman相關分析示58名患者外周血 mtDNA拷貝數(shù)與腰椎（

6、L1-4）BMD、T值呈負性相關（r=-0.341 p<0.01，r=-0.396 p<0.01）；其中同時行左右股骨骨密度檢測的45名患者中，其外周血 mtDNA拷貝數(shù)與左、右股骨 BMD、T值也呈負性相關（r=-0.543 p<0.01、r=-0.532 p<0.01；r=-0.483 p<0.01、r=-0.449 p<0.01）；但本組患者中mtDNA拷貝數(shù)與年齡、BMI無明顯相關性（p均>0.05）。
　　4. Spea

7、rman相關分析示58名患者外周血血清8-OHdG濃度與腰椎（L1-4）BMD、T值呈負性相關（r=-0.442 p<0.01，r=-0.439 p<0.01）；其中同時行左右股骨骨密度檢測的45名患者中，其外周血血清8-OHdG濃度與左、右股骨BMD、T值也呈負性相關（r=-0.397 p<0.01，r=-0.458 p<0.01；r=-0.423 p<0.01,r=-0.455 p<0.01）；本組患者中外周血血清8-OHdG濃度與

8、年齡、BMI無明顯相關性(p>0.05)，與mtDNA拷貝數(shù)亦無明顯相關性(p>0.05)。
　　5.多因素 Logistic回歸分析結(jié)果在校正其他影響因素后，本實驗回歸模型中的性別（女性）、8-OHdG、mtDNA拷貝數(shù)為原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的獨立危險因素，其中8-OHdG、mtDNA拷貝數(shù)OR分別為3.410（95％CI：1.011-11.504，P=0.048）、33.721（95%CI：2.926-388.600，p=0.00

9、5）。
　　結(jié)論：
　　1.mtDNA4.9kb（4977bp）、3.7kb片段缺失可能與中國人原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥患病關系不大。
　　2.患者外周血mtDNA拷貝數(shù)與骨組織mtDNA拷貝數(shù)有顯著相關性，這在一定程度上說明利用外周血mtDNA拷貝數(shù)來代替骨組織mtDNA拷貝數(shù)進行其變異的檢測的可行性。
　　3.外周血mtDNA拷貝數(shù)與腰椎（L1-4）及左右股骨BMD、T值明顯相關，這也證明了mtDNA可能參與原發(fā)性骨

10、質(zhì)疏松癥的發(fā)病。
　　4.外周血血清8-OHdG濃度也與腰椎（L1-4）及左右股骨BMD、T值明顯相關，這說明了氧化損傷機制在原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥發(fā)病中的作用。
　　5.外周血血清8-OHdG濃度與 mtDNA拷貝數(shù)無明顯相關性，這在一定程度上說明mtDNA氧化損傷可能不是原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥發(fā)病的主要機制。
　　6.血清8-OHdG、外周血mtDNA拷貝數(shù)是原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的獨立危險因素，對原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥有一定的預測價值。