兔脛骨延長不同比例對腓腸肌適應(yīng)性改建的影響.pdf

1、肢體延長技術(shù)是應(yīng)用牽張成骨原理解決臨床上肢體短縮畸形的有效手段，相關(guān)基礎(chǔ)研究的發(fā)展使其技術(shù)日益成熟并在臨床上有效廣泛應(yīng)用。牽張成骨過程常伴有并發(fā)癥出現(xiàn)，如肌肉攣縮、關(guān)節(jié)僵直、牽拉致周圍神經(jīng)血管的損傷等。Paley等在1990就提出了肢體延長中面臨的最大挑戰(zhàn)不是骨，而是骨骼肌。據(jù)檢索國內(nèi)外對骨緩慢延長引起的周圍軟組織損傷方面的基礎(chǔ)研究相對較少，只有深入探索被延伸骨骼肌的損傷修復(fù)機(jī)制，保持在肌肉功能正常前提下才能夠完成肢體延長的順利進(jìn)程。<

2、br>　　目的：
　　應(yīng)用單臂外固定支架建立兔脛骨骨干截骨延長的動物模型，在脛骨緩慢延長不同比例的各礦化時間點觀察被牽拉腓腸肌的組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化特點，研究力生長因子（MGF）、細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子pax7和成肌分化抗原MyoD在該過程中的表達(dá)變化趨勢，分析DO中骨骼肌對牽拉的承受能力，探索牽拉腓腸肌損傷修復(fù)的適應(yīng)性改建過程中的分子機(jī)制。
　　方法：
　　實驗動物選取成年日本大耳白兔，隨機(jī)分成實驗組和對照組。對照組僅行截骨術(shù)，不進(jìn)

3、行骨延長，術(shù)后一周取材腓腸?。粚嶒灲M根據(jù)脛骨延長幅度分為延長10％組，延長20%組，延長30%組，3個實驗組根據(jù)礦化時間點各分為5組：礦化0天（延長終止日，M0）、礦化7天（M7）、礦化14天（M14）、礦化28天（M28）和礦化56天（M56）。各時間點X線攝片后取材術(shù)側(cè)腓腸肌中段，固定后石蠟包埋切片，行HE染色和特異抗體的組織化學(xué)染色，光鏡下觀察腓腸肌組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化過程以及MGF、Pax7和Myod在牽拉不同長度下不同時相中的表

4、達(dá)變化情況，陽性部分進(jìn)行圖像分析，總結(jié)數(shù)據(jù)變化規(guī)律并分析原因。
　　結(jié)果：
　　1.動物模型制備技術(shù)的優(yōu)化保證各組實驗材料的順利獲取。根據(jù)取材前X線檢查和動物肢體外觀觀察，在脛骨延長原長度的20%以下，隨骨延長幅度的增加，骨痂的形成量在相同礦化時間會相對減少；在相同延長幅度下，隨礦化期延長，骨痂逐漸形成并清晰，骨痂量逐漸增多，骨髓腔出現(xiàn)，骨痂愈合。但是延長增至原長度的30%，骨痂形成極為緩慢，至D56組仍不能達(dá)到骨的滿意愈合

5、。
　　2.在牽張成骨過程中，延長10%和20%組被同期延長的腓腸肌在牽拉期和礦化早期出現(xiàn)明顯的損傷性改變，隨牽拉長度增加損傷程度加重，在礦化后期均出現(xiàn)骨骼肌的適應(yīng)性修復(fù)，D56組基本恢復(fù)骨骼肌的正常形態(tài)結(jié)構(gòu)，光鏡下可見明顯的肌纖維結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常；但是延長30%組，腓腸肌經(jīng)過最大長度牽拉后出現(xiàn)最嚴(yán)重的損傷表現(xiàn)，并且不可恢復(fù)，無論骨還是骨骼肌的損傷均為不可修復(fù)狀態(tài)。
　　3.在脛骨延長不同長度下的不同時期，腓腸肌中MGF、Pax

6、7和Myod表達(dá)量不同且有一定的表達(dá)規(guī)律。對照組中各時間點腓腸肌MGF、Pax7和Myod表達(dá)均為陰性或弱陽性。隨著脛骨延長的發(fā)生，腓腸肌 MGF的表達(dá)在礦化初始（D0組）即呈現(xiàn)強(qiáng)陽性表達(dá)，礦化7天表達(dá)下降但仍為陽性水平，礦化14天和礦化28天，MGF表達(dá)降低程度明顯，為弱陽性或陰性，至礦化56天MGF表達(dá)和對照組無差異：Pax-7的表達(dá)變化則在礦化初始（D0組）和礦化7天時均為強(qiáng)陽性表達(dá)，礦化14天時陽性表達(dá)減弱，但仍為陽性，礦化28

7、天時表達(dá)降低呈現(xiàn)出陰性或弱陽性表達(dá)，至礦化56天與對照組無差異；MyoD在礦化0天時表達(dá)呈陰性，隨礦化時間延長至礦化7天出現(xiàn)陽性表達(dá)，礦化14天MyoD表達(dá)量達(dá)到峰值，為強(qiáng)陽性，隨后表達(dá)緩慢減弱，礦化28天時呈陽性或弱陽性表達(dá)，至礦化56天MyoD表達(dá)和對照組無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　1.動物模型需要不斷改進(jìn)才會獲得成效高的實驗結(jié)果。骨延長技術(shù)有一定的限度，超過限度（大于肢體長度30%的延長）的延長成功性較差。
　

8、　2.適當(dāng)?shù)墓菭坷娱L比例在緩慢牽拉速率下對受牽拉損傷的骨骼肌所導(dǎo)致的亞臨床損傷是短暫的并且是可逆的。牽拉損傷的腓腸肌隨礦化時間的延長，可以自行得到適應(yīng)性修復(fù)。但在延長30%或以上，骨骼肌則會出現(xiàn)不可逆損傷。3.牽張成骨過程中，MGF、Pax7和Myod的表達(dá)變化和腓腸肌的組織學(xué)變化規(guī)律并不相同，都會有特定的表達(dá)高峰時期，后期均會表現(xiàn)為未損傷前的表達(dá)水平。這種表達(dá)變化趨勢說明作為肌衛(wèi)星細(xì)胞的主要標(biāo)志物，在骨骼肌的適應(yīng)性牽拉損傷修復(fù)過程中