RhoA-Rho激酶導(dǎo)致高脂血癥白兔勃起功能障礙機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分：目的：通過研究Rho激酶抑制劑法舒地爾改善高脂血癥性勃起功能障礙新西蘭大白兔陰莖勃起功能的效應(yīng)，初步探討Rho激酶在高脂血癥誘導(dǎo)陰莖勃起功能障礙中的作用。
　　
　　 方法：50只雄性新西蘭大白兔隨機(jī)分為正常對照組（25只）和實(shí)驗組（25只），25只正常對照組白兔給予正常飼料連續(xù)喂養(yǎng)8周，25只實(shí)驗組白兔給予含1％膽固醇的高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)8周。喂養(yǎng)前兩組新西蘭大白兔均檢測血膽固醇濃度、體重、動脈血壓和1.5m

2、g/Kg罌粟堿海綿體注射前后海綿體內(nèi)壓力變化。喂養(yǎng)8周后重復(fù)檢測上述指標(biāo)。應(yīng)用0.375mg/Kg、0.75mg/Kg、1.5mg/Kg法舒地爾直接陰莖海綿體內(nèi)注射，檢測兩組白兔平均動脈血壓和陰莖海綿體內(nèi)壓力變化情況。
　　
　　 結(jié)果：(1) 喂養(yǎng)前，實(shí)驗組和正常對照組白兔的體重和血總膽固醇水平無統(tǒng)計學(xué)差異。喂養(yǎng)8周后，實(shí)驗組白兔的體重(2.454±0.214Kg)及血總膽固醇水平（22.191±3.142mmol/

3、L）均明顯高于喂養(yǎng)前(1.922±0.130Kg和3.166±0.093mmol/L)（P=0.000）；正常對照組白兔的體重（2.109±0.145Kg）較喂養(yǎng)前(1.914±0.206Kg)明顯增加（P=0.000），而血總膽固醇水平無明顯變化。喂養(yǎng)8周后，實(shí)驗組白兔的體重(2.454±0.214Kg)及血總膽固醇水平（22.191±3.142mmol/L）均明顯高于正常對照組(2.109±0.145Kg和3.238±0.128mm

4、ol/L)（P=0.000）。(2) 實(shí)驗組白兔喂養(yǎng)8周后，1.5mg/Kg罌粟堿海綿體注射后誘導(dǎo)陰莖海綿體內(nèi)壓增高較喂養(yǎng)前明顯下降（8.339±0.829mmHgvs19.354±2.125mmHg）（P=0.000）；正常對照組白兔喂養(yǎng)8周后，1.5mg/Kg罌粟堿海綿體注射后誘導(dǎo)陰莖海綿體內(nèi)壓增高與喂養(yǎng)前無明顯變化；喂養(yǎng)8周后，實(shí)驗組白兔1.5mg/Kg罌粟堿海綿體注射后誘導(dǎo)陰莖海綿體內(nèi)壓增高較正常對照組明顯下降（8.339±0.

5、829mmHgvs18.997±2.232mmHg）（P=0.000）。(3)不同劑量法舒地爾（0.375mg/Kg、0.75mg/Kg、1.5mg/Kg）海綿體注射后，實(shí)驗組白兔陰莖海綿體內(nèi)壓增高分別為4.912±0.574mmHg、8.400±1.063mmHg、14.848±1.350mmHg，比正常對照組白兔陰莖海綿體內(nèi)壓增高的程度（3.336±0.889mmHg、5.465±0.609mmHg、11.952±1.290mmHg

6、）更明顯(P均為0.000)。
　　 結(jié)論：Rho激酶抑制劑法舒地爾能夠有效改善高脂血癥性勃起功能障礙白兔的陰莖勃起功能，這種效應(yīng)可能與Rho激酶活性上調(diào)有關(guān)。
　　 第二部分：目的：研究高脂血癥新西蘭大白兔離體陰莖海綿體平滑肌的收縮和舒張功能的變化，探討高脂血癥導(dǎo)致陰莖勃起功能障礙發(fā)生的機(jī)制。
　　
　　 方法：將50只雄性新西蘭大白兔隨機(jī)分為實(shí)驗組25只和正常對照組25只，25只正常對照組白兔給予正

7、常飼料連續(xù)喂養(yǎng)8周，25只實(shí)驗組白兔給予含1％膽固醇的高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)8周。8周后，兩組白兔離體陰莖海綿體平滑肌肌條應(yīng)用去氧腎上腺素誘導(dǎo)收縮，并記錄肌張力的改變。再應(yīng)用乙酰膽堿、硝普鈉、法舒地爾誘導(dǎo)平滑肌肌條舒張，并記錄肌張力的改變。
　　
　　 結(jié)果：（1）喂養(yǎng)前，實(shí)驗組和正常對照組白兔的體重和血總膽固醇水平無統(tǒng)計學(xué)差異。喂養(yǎng)8周后，實(shí)驗組白兔的體重(2.454±0.214Kg)及血總膽固醇水平（22.191±3.1

8、42mmol/L）均明顯高于喂養(yǎng)前(1.922±0.130Kg和3.166±0.093mmol/L)（P=0.000）；正常對照組白兔的體重（2.109±0.145Kg）較喂養(yǎng)前(1.914±0.206Kg)明顯增加（P=0.000），而血總膽固醇水平無明顯變化。喂養(yǎng)8周后，實(shí)驗組白兔的體重(2.454±0.214Kg)及血總膽固醇水平（22.191±3.142mmol/L）均明顯高于正常對照組(2.109±0.145Kg和3.238±

9、0.128mmol/L)（P=0.000）。（2）實(shí)驗組白兔離體陰莖海綿體平滑肌肌條在各劑量組去氧腎上腺素（0.5、1、5、10、50、100μmol/l）誘導(dǎo)下產(chǎn)生的收縮效應(yīng)分別為4.36±1.20％、8.65±1.97％、13.17±3.10％、17.06±4.63％、24.49±5.01％和32.33±6.24％均明顯高于正常對照組（1.12±0.29％、2.51±0.56％、4.40±0.77％、6.14±1.28％、 7.61

10、±3.40％和6.40±5.13％）(P=0.000）。（3）實(shí)驗組白兔離體陰莖海綿體平滑肌肌條在1、10、100μmol/l劑量組乙酰膽堿誘導(dǎo)下產(chǎn)生的舒張效應(yīng)分別為34.95±3.83％、45.58±6.07％和 58.46±4.01％，明顯低于正常對照組（47.44±3.94％、65.85±4.77％、75.36±4.18％）(P=0.000）。（4）實(shí)驗組白兔離體陰莖海綿體平滑肌肌條在硝普鈉誘導(dǎo)下產(chǎn)生的舒張效應(yīng)與正常對照組差異無統(tǒng)

11、計學(xué)意義。（5）實(shí)驗組白兔離體陰莖海綿體平滑肌肌條在0.5、1、5、10μmol/l 4個劑量組作用下產(chǎn)生的舒張效應(yīng)分別為1.83±0.49％、5.60±1.71％、10.20±3.40％和18.95±4.16％，明顯低于正常對照組（4.31±1.33％、9.98±1.33％、16.10±2.23％和25.67±2.68％）（P=0.000）。
　　 結(jié)論：高脂血癥白兔陰莖海綿體平滑肌收縮功能增強(qiáng)，這種收縮功能增強(qiáng)可能與Rho激

12、酶過度活化有關(guān)。高脂血癥白兔陰莖海綿體同時合并內(nèi)皮依賴的舒張功能減弱。上述變化參與高脂血癥誘導(dǎo)勃起功能障礙的發(fā)生。
　　 第三部分：目的：研究RhoA/Rho激酶在高脂血癥誘導(dǎo)勃起功能障礙新西蘭大白兔陰莖海綿體平滑肌中的表達(dá)，探討RhoA/Rho激酶在高脂血癥誘導(dǎo)陰莖勃起功能障礙發(fā)生中的作用。
　　 方法：將50只雄性新西蘭大白兔隨機(jī)分為實(shí)驗組25只（含1％膽固醇的高脂飼料喂養(yǎng)8周）和正常對照組25只（正常飼料喂養(yǎng)8周）

13、。喂養(yǎng)前兩組新西蘭大白兔均檢測血膽固醇濃度、體重、動脈血壓和1.5mg/Kg罌粟堿海綿體注射前后海綿體壓力變化。喂養(yǎng)8周后再次檢測上述指標(biāo)。取兩組新西蘭大白兔陰莖海綿體平滑肌組織，應(yīng)用Real-time RT-PCR和Western 印跡法檢測陰莖海綿體平滑肌組織中RhoA和Rho激酶的mRNA和蛋白表達(dá)在兩組之間的差異。
　　 結(jié)果：(1) 喂養(yǎng)前，實(shí)驗組和正常對照組白兔的體重和血總膽固醇水平無統(tǒng)計學(xué)差異。喂養(yǎng)8周后，實(shí)驗組白

14、兔的體重(2.454±0.214Kg)及血總膽固醇水平（22.191±3.142mmol/L）均明顯高于喂養(yǎng)前(1.922±0.130Kg和3.166±0.093mmol/L)（P=0.000）；正常對照組白兔的體重（2.109±0.145Kg）較喂養(yǎng)前(1.914±0.206Kg)明顯增加（P=0.000），而血總膽固醇水平無明顯變化。喂養(yǎng)8周后，實(shí)驗組白兔的體重(2.454±0.214Kg)及血總膽固醇水平（22.191±3.142

15、mmol/L）均明顯高于正常對照組(2.109±0.145Kg和3.238±0.128mmol/L)（P=0.000）。(2) 實(shí)驗組白兔喂養(yǎng)8周后，1.5mg/Kg罌粟堿海綿體注射后誘導(dǎo)陰莖海綿體內(nèi)壓增高較喂養(yǎng)前明顯下降（8.339±0.829mmHgvs19.354±2.125mmHg）（P=0.000）；正常對照組白兔喂養(yǎng)8周后，1.5mg/Kg罌粟堿海綿體注射后誘導(dǎo)陰莖海綿體內(nèi)壓增高與喂養(yǎng)前無明顯變化；喂養(yǎng)8周后，實(shí)驗組白兔1.

16、5mg/Kg罌粟堿海綿體注射后誘導(dǎo)陰莖海綿體內(nèi)壓增高較正常對照組明顯下降（8.339±0.829mmHgvs18.997±2.232mmHg）（P=0.000）。（3）熒光定量 RT-PCR顯示，RhoA mRNA在高脂血癥白兔陰莖海綿體平滑肌組織中表達(dá)是正常對照組的0.95倍。Rho激酶1mRNA在高脂血癥白兔陰莖海綿體平滑肌組織中表達(dá)是正常對照組的1.09倍。（4） Western 印跡法顯示Rho激酶2和胞膜結(jié)合RhoA蛋白在高脂