福辛普利拉對(duì)培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的保護(hù)作用及其與鈣泵的關(guān)系.pdf

1、目的：探討福辛普利拉對(duì)培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞缺氧／復(fù)氧損傷的保護(hù)作用及其與肌漿網(wǎng)鈣泵的關(guān)系。 方法：實(shí)驗(yàn)用SD新生大鼠(1～3 d)，雌雄不拘，無(wú)菌取出乳鼠心臟，經(jīng)分離附著組織，胰蛋白酶消化，培養(yǎng)成心肌細(xì)胞，在培養(yǎng)的第4 d隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照(Contro1)組、缺氧／復(fù)氧(A／R)組、福辛普利拉劑量1+A／R(F1+A／R)組、福辛普利拉劑量2+A／R(F2+A／R)組、福辛普利拉劑量3+A／R(F3+A／R)組。建立缺氧／復(fù)氧

2、損傷模型，以福辛普利拉進(jìn)行干預(yù)，各組分別進(jìn)行以下指標(biāo)觀察：①心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率；②細(xì)胞存活率(MTT法)；③培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)活性；④；RT-PCR法檢測(cè)心肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)鈣泵(SERCA2)mRNA的表達(dá)水平；⑤流式細(xì)胞儀測(cè)定心肌細(xì)胞內(nèi)游離Ca<'2+>濃度。 結(jié)果：①．細(xì)胞搏動(dòng)頻率：A／R組(11.50±3.39bea，t／min)與Control組(99.83±4.22)相比，細(xì)胞搏動(dòng)頻率明顯減低，有顯著性差異(P<0

3、.01)；福辛普利拉各劑量組與A／R組相比，其心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率均較快，有顯著性差異(P<0.01)；福辛普利拉各劑量組與Contr01組比細(xì)胞搏動(dòng)頻率雖減慢，但無(wú)顯著性差異(P>0.05)。②．細(xì)胞存活率： A／R(26.78±4.25％)組與Control組(87.96±2.58％)比較，細(xì)胞存活率明顯降低，有顯著差異(p<0.01)；福辛普利拉各劑量組與A／R組相比，細(xì)胞存活率明顯增高，均有顯著性差異(P<0.01)，與Contr

4、o1組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)。③．LDH活性：A／R組(69.50±7.34 IU／L)與Control組(10.33±2.73)比較，LDH活性明顯升高，有顯著性差異(P<0.01)；福辛普利拉各劑量組與A／R組相比，LDH明顯降低，均有顯著性差異(p<0.01)，與Control組相比雖有升高但無(wú)顯著性差異(P>0.05)④．肌漿網(wǎng)鈣泵(SERCA2)mRNA的表達(dá)水平：A／R組與Contro1組相比，心肌細(xì)胞SERCA2

5、 mRNA條帶明顯變窄，顏色變淺，示表達(dá)下調(diào)，經(jīng)光密度分析后發(fā)現(xiàn)，A／R組SERCA2 mRNA為Control組的0.78±0.30倍，差異有顯著性意義(P<0.01)；福辛普利拉各劑量組心肌細(xì)胞SERCA2 mRNA較A／R組顯著上調(diào)，F(xiàn)1+A／R組、F2+A／R組、F3+A／R組分別為A／R組的2.06±0.41倍、2.69+0.17倍、1.84±0.63倍；均有顯著性差異(P<0.01)。⑤．心肌細(xì)胞內(nèi)游離Ca<'2+>濃度：A

6、／R組(3.24±0.64)與Control組(1.08±0.16)比較，明顯升高，有顯著差異(P<0.01)；F1+A／R組、F2+A／R組、F3+A／R組分別為1.65±0.33、1.12±0.24、1.24±0.31與A／R組相比，細(xì)胞內(nèi)Ca<'2+>明顯降低，均有顯著性差異(P<0.01)；與Control組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： ①．肌漿網(wǎng)鈣泵(SERCA2)mRNA在正常心肌細(xì)胞內(nèi)有基礎(chǔ)表達(dá)；