Pseudomonas stutzei F1M反硝化特性及其調(diào)節(jié)草魚養(yǎng)殖水體水質(zhì)的研究.pdf

1、本論文以一株反硝化菌Pseudomonas stutzeri F1M為研究對象，通過測定環(huán)境因子對其生長、脫氮效果和亞硝酸還原酶基因表達的影響，揭示其反硝化特性，并探索其對草魚養(yǎng)殖水體水質(zhì)的調(diào)控作用。旨在為反硝化菌的廣泛應用提供依據(jù)，促進養(yǎng)殖行業(yè)健康發(fā)展。
　　 主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　 1.Pseudomonas stutzeri F1菌的馴化及其亞硝酸還原酶基因的鑒定
　　 采用逐漸提高模擬廢水中亞硝酸

2、鹽氮濃度的方式，馴化實驗室保存的原始菌Pseudomonas stutzeri F1，獲得一株24h內(nèi)可降解50mg/L亞硝酸鹽氮的菌。通過對其亞硝酸還原酶基因的克隆鑒定，表明該菌株的亞硝酸還原酶為細胞色素cd1型，其nitS序列與施氏假單胞菌的同源性達99％，將其命名為Pseudomonasstutzeri F1M。
　　 2.環(huán)境因子對Pseudomonas stutzeri F1M生長、脫氮及nirS基因表達的影響

3、　　 將Pseudomonas stutzeri F1M分別接種至不同水平氮源、初始亞硝酸鹽氮濃度、碳源、碳氮比或溫度的模擬廢水中培養(yǎng)24h。氮源為亞硝酸鈉、硝酸鈉、氯化銨三個水平;初始亞硝酸鹽氮濃度為10、30、50、70mg/L四個水平;碳源為檸檬酸鈉、葡萄糖、淀粉三個水平;碳氮比為0、2、4、6、8五個水平;溫度為15、20、25、30、35℃五個水平。采用吸光度值法測定0h和24h Pseudomonas stutzeriF1

4、M培養(yǎng)基的OD600及亞硝酸鹽氮、硝酸鹽氮和氨氮濃度;利用熒光定量PCR技術(shù)測定培養(yǎng)24h后該菌的nirS基因的相對表達量。結(jié)果顯示Pseudomonasstutzeri F1M的生長最適條件為:氮源為亞硝酸鈉，初始亞硝酸鹽氮濃度為50-70mg/L(P＜0.05);碳源為檸檬酸鈉;C/N為4-8(P＜0.05);溫度為25-35℃。Pseudomonas stutzeri F1M在模擬養(yǎng)殖水體中能有效去除亞硝酸鹽氮，當初始亞硝酸鹽氮濃

5、度為10-50mg/L(P＜0.01)，碳源為檸檬酸鈉(P＜0.05)，C/N為4-8(P＜0.01)，溫度為25-35℃(P＜0.01)時，對亞硝酸鹽氮去除率達到99％以上。當?shù)礊閬喯跛徕c(P＜0.01)，初始亞硝酸鹽氮濃度為30或70mg/L(P＜0.01)，碳源為淀粉(P＜0.01)，C/N為0(P＜0.01)，溫度為25或35℃(P＜0.01)時，Pseudomonas stutzeri F1M nirS基因表達量最高。

6、>　　 3.Pseudomonas stutzeri F1M對草魚養(yǎng)殖水體水質(zhì)的調(diào)控
　　 選擇初始體重為5±1g的草魚2400尾，隨機分為4組，每組3個重復，每7天分別向水中添加0、0.2×108、1×108和2×108cfu/L Pseudomonas stutzeri F1M，各組飼喂相同飼料。試驗期為15天，每3天測定亞硝酸鹽氮、硝酸鹽氮、氨氮、總氮、正磷酸鹽、總磷等水質(zhì)指標。結(jié)果顯示，1×108和2×108cfu/L

7、 Pseudomonasstutzeri F1M均可有效降解水體亞硝酸鹽氮和總無機氮，15天時，亞硝酸鹽氮和總無機氮濃度分別比對照組減16.8％、15.3％和49.5％(P＜0.01)、51.8％(P＜0.01)。表明Pseudomonas stutzeri F1M調(diào)控草魚養(yǎng)殖水體水質(zhì)的最適添加量為1×108cfu/L。
　　 4.檸檬酸鈉對Pseudomonas stutzeri F1M調(diào)控水質(zhì)的影響
　　 選取初始體

8、重為50±3g的草魚240尾，隨機分為3組，每組3個重復，處理組每7天分別向水中添加1×108cfu/L Pseudomonas stutzeri F1M和1×108cfu/LPseudomonas stutzeri F1M+50g檸檬酸鈉，對照組不添加，各組飼喂相同飼料，試驗期為15天，每3天測定水質(zhì)指標。結(jié)果顯示，1×108cfu/L Pseudomonas stutzeriF1M和1×108cfu/L Pseudomonas st

9、utzeri F1M+50g檸檬酸鈉兩個處理組都能有效降解水體的亞硝酸鹽氮和總無機氮，15天時，亞硝酸鹽氮和總無機氮濃度分別比對照組減95.1％(P＜0.01)、97.9％(P＜0.01)和46.9％(P＜0.05)、54.4％(P＜0.01)。但兩組的氮磷等水質(zhì)指標無顯著差異，表明檸檬酸鈉對Pseudomonasstutzeri F1M調(diào)控草魚養(yǎng)殖水體水質(zhì)無顯著影響。
　　 綜上所述，本論文系統(tǒng)研究了Pseudomonas s