登革熱病毒分型及患者細(xì)胞因子mRNA水平研究.pdf

1、目的:利用高分辨率熔解曲線（HRM）分析技術(shù)，對四型登革熱病毒(DEV)進(jìn)行快速準(zhǔn)確分型鑒定，彌補(bǔ)現(xiàn)有分型方法的不足;利用定量PCR方法，檢測登革熱患者體內(nèi)白細(xì)胞介素12(IL-12)、白細(xì)胞介素10(IL-10)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、干擾素γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子α（TNF-α）mRNA的表達(dá)水平，闡明人體在登革熱病毒感染期，體內(nèi)固有免疫和適應(yīng)性免疫的情況。
　　方法:
　　1.根據(jù)NCBI公布的序列，設(shè)計HR

2、M分型引物，對不同型別登革熱進(jìn)行分型鑒定，并進(jìn)行靈敏度和特異性試驗(yàn)，同時采用測序、熒光PCR和普通PCR方法，對HRM分型結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。
　　2.對21例登革熱患者和21例健康對照者采集靜脈血，用比較CT值法(2-△△CT)，檢測IL-12、IL-10、IL-6、IFN-γ、TNF-α mRNA的表達(dá)水平，分析登革熱患者相關(guān)細(xì)胞因子mRNA變化情況及其與健康對照組之間的差異。
　　結(jié)果:
　　1.應(yīng)用HRM分析技術(shù)

3、，可對四型登革熱病毒進(jìn)行準(zhǔn)確分型，靈敏度高，特異性強(qiáng)，HRM分型結(jié)果與測序、熒光PCR和普通PCR分型結(jié)果無異。
　　2.登革熱患者體內(nèi)IL-12、IL-10、IFN-γ、TNF-α mRNA的表達(dá)水平較健康對照組顯著升高，有顯著性差異(P＜0.01，0.05，0.01，0.05);IL-6 mRNA的表達(dá)水平較健康對照組有所降低，但無顯著性差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.本研究建立了登革熱病毒PCR-HR

4、M分型檢測方法，與測序、熒光PCR和普通PCR相比，該方法為登革熱分子診斷提供了一種更為快速、準(zhǔn)確、廉價的檢測方法。
　　2.登革熱病毒(DEV)感染可以導(dǎo)致患者體內(nèi)IL-12、IL-10、IL-6、IFN-γ、TNF-α五種細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平的變化，這些細(xì)胞因子可能在登革熱的發(fā)病機(jī)制和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用。
　　3.Th1/Th2細(xì)胞因子失衡，在登革熱患者感染過程和疾病轉(zhuǎn)化中可能發(fā)揮重要作用。登革熱患者IL-12 mR