PCSK9與血壓、糖代謝關系的臨床與基礎研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行論述：
　　第一部分 PCSK9與血壓關系的臨床研究.
　　目的:高脂血癥與高血壓是冠心病公認的危險因素。目前，已經(jīng)證實升高的低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)與新發(fā)高血壓風險增加密切相關。由肝臟分泌的前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是LDL-C的主要調(diào)節(jié)因素，它通過與低密度脂蛋白受體(LDLR)結(jié)合并使之降解，從而使LDL-C水平升高。然而，PCSK9與血壓水平之間的關系尚不明確，因此，本研究旨

2、在探討PCSK9與血壓及頸動脈內(nèi)中膜厚度(IMT)的關系。
　　方法:自2012年10月至2014年10月，連續(xù)入選了805例阜外醫(yī)院血脂中心住院病人，這些病人均未服用降脂藥物。入選對象的臨床基線資料按病例信息采集表收集。血清PCSK9水平按高敏三明治酶聯(lián)免疫反應方法測定，利用B超評定左右側(cè)頸動脈內(nèi)中膜厚度(IMT)。分別分析PCSK9與血壓、頸動脈內(nèi)中膜厚度及其他代謝因子的關系。
　　結(jié)果:在本研究整體人群、高血壓及非高血

3、壓亞組人群中，均未發(fā)現(xiàn)PCSK9與收縮壓及舒張壓相關，而在非高血壓人群PCSK9卻顯示與脈壓差值呈負相關。根據(jù)性別分層，無論高血壓組還是非高血壓組均未發(fā)現(xiàn)PCSK9與SBP及DBP相關。此外，非高血壓女性人群中，PCSK9水平與脈壓差值呈負相關。在高血壓病人中，PCSK9與最大及平均頸動脈內(nèi)中膜厚度正相關(r=0.206，r=0.186，P＜0.05)，校正年齡后，這種關系消失，而在非高血壓病人中，PCSK9與IMT無關。此外，無論在高

4、血壓人群還是非高血壓人群，PCSK9水平均與LDL-C、apoB、apoAI和HbA1c正相關。
　　結(jié)論:本研究表明，PCSK9水平與收縮壓、舒張壓無關，提示阻斷或降低PCSK9表達可能對血壓并無影響，此外，在本隊列研究中，PCSK9與頸動脈IMT不是獨立相關，提示降低PCSK9表達或PCSK9抑制劑對頸動脈早期動脈粥樣硬化的作用可能受其他因素影響?？傊琍CSK9與血壓及頸動脈粥樣硬化之間的關系仍需進一步的研究。
　　第

5、二部分 PCSK9與糖代謝關系的臨床研究——血漿PCSK9濃度與HbA1c的關系.
　　目的:前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(Proprotein convertasesubtilisin/kexin type9，PCSK9)作為一種主要由肝臟表達的分泌性前蛋白轉(zhuǎn)化酶，可以通過降解低密度脂蛋白受體(low-density lipoprotein receptor，LDLR)從而增加血液中低密度脂蛋白膽固醇的濃度。盡管已經(jīng)證實，PCSK9

6、參與低密度脂蛋白膽固醇調(diào)節(jié)，然而，PCSK9與糖代謝之間的具體關系尚不明確。糖化血紅蛋白(HbA1c)是血糖控制的金標準以及預測脂代謝異常與診斷2型糖尿病的重要指標。本研究選取連續(xù)入院的非降脂治療的糖尿病及非糖尿病人群旨在探討PCSK9與HbA1c之間的關系。
　　方法:連續(xù)納入了自2012年10月至2014年10月在阜外醫(yī)院血脂中心住院的非降脂藥物服用的病人共805例，其中包括糖尿病病人176例，非糖尿病病人629例。收集入選人

7、群的基線資料，用自動生化儀檢測生化指標。血漿PCSK9水平以高敏定量夾心酶免疫法檢測。采用單變量及多變量線性回歸模型分析PCSK9與HbA1c之間的關系。比較PCSK9三分位情況下HbA1c水平及糖尿病人群血糖控制好(HbA1c＜7.0％)壞(HbA1c≥7.0％)情況下的PCSK9水平。
　　結(jié)果:在糖尿病人群及非糖尿病人群，PCSK9水平均與低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)正相關。單變量線性回歸分析模型顯示，在糖尿病人群，PC

8、SK9與HbA1c正相關(β=0.255，P=0.001)，而在非糖尿病人群卻不相關(β=0.061，p=0.128)。多元線性回歸分析揭示，在校正傳統(tǒng)動脈粥樣硬化危險因素后，PCSK9與HbA1c獨立正相關(β=0.197，P=0.020)。高PCSK9濃度組的HbA1c比低PCSK9濃度組更高(P=0.042)。此外，與血糖控制好的糖尿病人群相比，血糖控制不好者具有更高的PCSK9水平(P=0.029)。
　　結(jié)論:研究數(shù)據(jù)首

9、次表明，在2型糖尿病人群，血漿PCSK9濃度與HbA1c正相關，提示PCSK9可能對2型糖尿病有某種潛在的作用。
　　第三部分 PCSK9與糖代謝關系的基礎研究——胰高血糖素樣肽-1類似物利拉魯肽對PCSK9表達的影響.
　　目的:前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是主要由肝臟分泌的一種膽固醇平衡調(diào)節(jié)蛋白酶，可以通過降解低密脂蛋白受體(LDLR)從而升高循環(huán)中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的濃度。PCSK9除了參與脂質(zhì)

10、代謝外，還可能與糖代謝有關，但具體關系尚不明確。胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)是一種腸道L細胞分泌的葡萄糖濃度依賴性促胰島素激素，不僅參與血糖調(diào)節(jié)，而且還可以降低LDL-C。然而，GLP-1與PCSK9的之間的關系尚不清楚。本研究旨在探討GLP-1對PCSK9表達的影響。
　　方法:在細胞水平上，用GLP-1類似物利拉魯肽刺激HepG2細胞，用蛋白免疫印跡方法檢測利拉魯肽對PCSK9蛋白表達的影響。在動物水平上，24只7周齡雄性

11、db/db小鼠平均分為兩組，一組給予利拉魯肽皮下注射（200ug/Kg，2/日）（利拉魯肽組，LIRA組，n=12），一組給予等體積的生理鹽水皮下注射（2/日）（鹽水組，n=12）;同窩野生型小鼠16只平均分為2組，一組給予利拉魯肽皮下注射（200ug/Kg，2/日）（利拉魯肽組，LIRA組，n=8），一組給予等體積的生理鹽水皮下注射（2/日）（鹽水組，n=8）。每周測小鼠體重、攝食量及空腹血糖。連續(xù)皮下注射7周后處死，采血分離血清，分

12、別以自動生化儀、酶標儀測血脂及PCSK9水平，留取肝臟組織做油紅O染色檢測肝臟脂質(zhì)沉積，以免疫組組化、免疫熒光、蛋白免疫印跡、RT-PCR檢測PCSK9及LDLR表達水平。
　　結(jié)果:細胞水平，利拉魯肽抑制了HepG2細胞PCSK9蛋白的表達，且存在時間-濃度依賴性。動物水平，首先，利拉魯肽降低了野生型及db/db小鼠攝食量及體重，降低了db/db小鼠空腹血糖;其次，利拉魯肽降低了db/db小鼠甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、

13、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)及LDL-C，但對野生型小鼠的血脂無明顯改變;第三，給予利拉魯肽注射的db/db小鼠血清PCSK9水平[27.00(19.34，35.50)]明顯低于給予生理鹽水注射的db/db小鼠血清PCSK9水平[38.87(29.73，49.80)，P=0.021]，但野生型小鼠LIRA組血清PCSK9水平[28.24(16.72，61.33)]與野生型小鼠鹽水組血清PCSK9水平[19.90(16.43，31.4