白藜蘆醇促進(jìn)大鼠心臟低溫保存后心功能恢復(fù)的研究.pdf

1、背景：
　　心臟移植手術(shù)是終末期心力衰竭和嚴(yán)重冠脈疾病患者首選的治療手段。而如何減輕供體心臟低溫保存后再灌注損傷是心臟移植成功的前提和關(guān)鍵。許多研究者對各種心臟低溫保存液的成分進(jìn)行了相應(yīng)的調(diào)整，比如添加了氧自由基清除劑、鈣離子拮抗劑等，雖然這些措施也確實不同程度地提高了供體心臟低溫保存后再灌注期心功能的恢復(fù)，但當(dāng)供體心臟的保存時間大于6h時，這些改進(jìn)措施的效果明顯下降。因此，如何通過改進(jìn)心臟低溫保存液的成分，延長心臟保存的時間，提

2、高保存效果，減輕再灌注損傷，是我們現(xiàn)今迫切需要解決的問題。
　　白藜蘆醇（Resveratrol）是一種非類黃酮的多酚物質(zhì)，1939年由日本科學(xué)家從植物白藜蘆的根莖中提取并將其命名之。天然的白藜蘆醇在葡萄、桑葚等多種植物中含量豐富。目前，大量的研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇在哺乳動物的體內(nèi)外均具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，包括預(yù)防腫瘤、延長壽命、對抗代謝性疾病、保護(hù)心血管系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)等作用。白藜蘆醇的這些作用被認(rèn)為與其強(qiáng)大的抗氧化、抗炎特性有關(guān)。因

3、此，我們推測，白藜蘆醇可能具有延長心臟低溫保存時間，提高供心低溫保存效果的作用，從而使遠(yuǎn)距獲取供心，擴(kuò)大供心來源成為可能。
　　目的：
　　利用大鼠心臟低溫保存和Langendorff再灌注模型，觀察在心臟低溫保存液中添加白藜蘆醇后，是否可延長心臟保存時間，減輕心臟低溫保存后再灌注損傷;并初步探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　(1)大鼠心臟低溫保存模型的構(gòu)建和心功能的測定離體SD大鼠心臟在Langendor

4、ff心臟灌注裝置上平衡30min后，經(jīng)主動脈根部逆行灌注心臟低溫保存液（Celsior液），灌注溫度為4℃，時間3min以內(nèi)。待心臟停搏后分別置于4℃含不同濃度白藜蘆醇(0、10、20、40μM)的Celsior液中保存9h，隨后心臟重新置于Langendorff裝置上，于37℃，用Krebs-Henseleit液體（KH液）再灌注60min。通過MedLab生物信號采集處理系統(tǒng)觀察心臟血流動力學(xué)的改變，包括:左心室舒張末期壓力(lef

5、t ventricular end-diastolic pressure，LVEDP)、左心室發(fā)展壓力(leftventricular developed pressure，LVDP)、心室最大收縮速率(Maximal systolic velocityof left ventricular pressure，+dP/dtmax)、心室最大舒張速率(Maximal diastolicvelocity of left ventricula

6、r pressure，-dP/dtmax)、心率(heart rate，HR)及冠脈流量(coronary flow，CF)等。
　　(2)Western blot測定心臟解偶聯(lián)蛋白2(uncoupling protein2，UCP2)表達(dá)實驗結(jié)束后取左心室肌，勻漿、離心后提取全細(xì)胞蛋白。每組取20μg蛋白于10％SDS-PAGE后，轉(zhuǎn)膜，封閉。硝酸纖維素膜用UCP2抗體(1∶1000)于4℃孵育過夜，洗脫后用辣根過氧化物酶結(jié)合的

7、二抗室溫孵育2h。用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法探測目標(biāo)蛋白。
　　結(jié)果：
　　(1)與空白對照組（即未于Celsior液中進(jìn)行冷保存組）相比，大鼠離體心臟低溫缺血保存9h后，在再灌注60min時LVEDP明顯抬高，LVDP、+dP/dtmax和-dP/dtmax恢復(fù)率均明顯下降，心率和冠脈流量也顯著下降。在Celsior心臟保存液中添加了不同濃度的白藜蘆醇后，可濃度依賴性地對抗低溫保存誘導(dǎo)的LVDP抬高，LVDP、+dP/dtmax和-

8、dP/dtmax的下降，以及心率和冠脈流量的下降。
　　(2)與空白對照組相比，大鼠離體心臟低溫缺血保存9h后，心室肌組織中UCP2的表達(dá)明顯增高，約為空白對照組的3.2倍。在Celsior心臟保存液中添加了中、高濃度白藜蘆醇(20、40μM)后，對低溫保存誘導(dǎo)的UCP2過表達(dá)有明顯的抑制作用。
　　(3)與單純低溫保存組（Celsior組）相比，在Celsior心臟保存液中添加了SIRT1（Sirtuin type1）抑制

9、劑6-氯-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-甲酰胺（（6-Chloro-2,3,4,9-tetrahydro-1 H-Carbazole-1-carboxamide,EX-257）對心肌UCP2的表達(dá)，以及心功能指標(biāo)均無明顯影響。但EX-257可對抗高濃度白藜蘆醇(40μM)對低溫保存誘導(dǎo)UCP2過表達(dá)的抑制作用，并取消白藜蘆醇對低溫保存心臟心功能的保護(hù)作用。
　　結(jié)論：
　　在心臟低溫保存液中添加了白藜蘆醇后，可促進(jìn)低