華蟾素在對小鼠系統(tǒng)性白念珠菌感染中免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、【目的】觀察華蟾素對小鼠腹腔激活巨噬細(xì)胞（Mφ）體外抗白念珠菌活性的影響及其機(jī)制，以探討華蟾素在體外抗白念感染中的作用，同時探討華蟾素在體內(nèi)抗小鼠系統(tǒng)性白念珠菌感染中的作用，為其臨床抗白念感染的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　【方法】第一部分體外實(shí)驗(yàn)：1.分離純化小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，用脂多糖（LPS）激活，與不同濃度華蟾素共同培養(yǎng)24h，棄上清，再與一定濃度的白念珠菌共同培養(yǎng)4h。收集 Mφ培養(yǎng)液上清用于細(xì)胞因子活性測定，細(xì)胞用于吞噬活性殺

2、傷功能檢測。2.用平皿稀釋法測定每毫升白念珠菌菌落形成單位（CFU/ml），以檢測華蟾素對Mφ吞噬殺傷白念的影響。3.用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中 TNF-α濃度，以檢測華蟾素對激活 Mφ分泌 TNF-α的影響。4.以 Griess法測定培養(yǎng)細(xì)胞上清液中一氧化氮（NO）的濃度，以檢測華蟾素對激活Mφ分泌NO的影響。第二部分體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：①建立用環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫抑制小鼠系統(tǒng)性白念珠菌感染動物模型，設(shè)立處理組（白念珠菌感

3、染前注射華蟾素）和對照組（白念珠菌感染前注射等劑量無菌 PBS）。②在白念珠菌感染第2天、第3天、第7天，用平皿稀釋法檢測處理組和對照組小鼠腎、脾組織菌落形成單位（CFU）的數(shù)目，通過對比來評估華蟾素抗白念珠菌活性。③小鼠感染第2天、第3天、第7天制作腎、脾組織病理學(xué)標(biāo)本，評估真菌感染情況。④通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對比兩組小鼠感染第2天、第3天、第7天脾干擾素γ分泌水平，以此探求華蟾素在對小鼠系統(tǒng)性白念珠菌感染中免疫調(diào)節(jié)作免

4、疫防護(hù)中作用的機(jī)制。
　　【結(jié)果】1.當(dāng)華蟾素的濃度為0.2mg/mL及0.4mg/mL時，其白念生長抑制率分別為35.6%、38.5%，與單純巨噬細(xì)胞對照組（抑制率28.4%）比較差異有顯著性（P<0.05），說明華蟾素可顯著增強(qiáng) Mφ對白念的吞噬殺傷活性；2.當(dāng)華蟾素濃度分別為0.05、0.1、0.2、0.4mg/mL時， Mφ分泌 TNF-α的水平明顯增高，與對照組相比差異有顯著性（P<0.05）；3.當(dāng)華蟾素濃度分別為0.

5、1、0.2、0.4mg/mL時，則Mφ產(chǎn)生NO的水平與對照組相比明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在小鼠感染白念珠菌第2天、第3天、第7天，處理組腎 CFU分別為4.9953±0.0726、4.7751±0.1780、3.9547±0.1234，對照組腎臟 CFU分別為5.7865±0.1095、6.0970±0.0794、5.9958±0.0817，處理組腎臟 CFU值低于對照組，差異具有顯著性（P<0.01）。處理組脾臟

6、CFU分別為5.2360±0.0696、4.6332±0.1139、3.5120±0.3120，對照組脾臟CFU為5.3579±0.1174、4.7599±0.1207、3.6385±0.1851，處理組脾臟 CFU值低于對照組，差異無顯著性（P>0.05）。腎組織病理學(xué)評分處理組低于對照組，處理組比對照組感染的程度減輕，有顯著差異性(P<0.05）；脾組織病理學(xué)評分處理組低于對照組，差異無顯著性（P>0.05）。檢測脾干擾素γ分泌水平

7、，感染第2天、第3天、第7天，處理組為73.5312±5.9701pg/ml、92.1207±7.5136pg/ml、108.5212±9.2921pg/ml,對照組為40.2389±4.1956pg/ml、59.3161±5.1913pg/ml、64.3723±5.1912pg/ml，處理組高于對照組，具有顯著差異性（P<0.01）。
　　【結(jié)論】華蟾素可以顯著促進(jìn)激活的巨噬細(xì)胞對白念珠菌的吞噬殺傷功能，這種促進(jìn)作用可能與其促進(jìn)