非小細(xì)胞肺癌病人圍術(shù)期三種循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其上TAZ基因表達(dá)的檢測.pdf

1、肺癌目前是引起全世界引起死亡所占比例最大的癌癥，全球每年約有150余萬人死于肺癌。近年來，雖然肺癌的手術(shù)治療及放化療治療領(lǐng)域取得了一些進(jìn)展，但肺癌的治愈率仍然令人失望，而且5年生存率也維持在比較低的水平，約為15％。肺癌根據(jù)組織學(xué)類型，可以分為非小細(xì)胞肺癌和小細(xì)胞肺癌兩種。其中，非小細(xì)胞肺癌約占肺癌總數(shù)的85％至90％，其中又分為肺鱗狀上皮細(xì)胞癌（約占25％至30％）、肺腺癌（約占40％）及肺大細(xì)胞癌（又名肺未分化癌，約占10％至15％

2、）。一般來說，這三種組織亞型非小細(xì)胞肺癌預(yù)后并無明顯差異。
　　造成非小細(xì)胞肺癌預(yù)后不良的主要因素是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移可以在非小細(xì)胞肺癌患者早期就發(fā)生。這就解釋了為什么非小細(xì)胞肺癌患者在切除原發(fā)病灶后仍然會復(fù)發(fā)。關(guān)于腫瘤灶為什么在早期就可發(fā)生轉(zhuǎn)移一直是一個有爭論的話題。比較被學(xué)術(shù)界認(rèn)可的觀點是，腫瘤灶上的腫瘤細(xì)胞通過上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用從較為穩(wěn)定的上皮型腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化為間質(zhì)型腫瘤細(xì)胞，這一轉(zhuǎn)化使得腫瘤細(xì)胞具有更強的侵襲性。這些腫瘤細(xì)胞

3、入血形成循環(huán)腫瘤細(xì)胞，隨著血液流動播散至全身各處形成局部腫瘤灶。
　　上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化指的是上皮細(xì)胞經(jīng)過一系列生物化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)化為間質(zhì)表型細(xì)胞的過程，多種通路在這一進(jìn)程中扮演重要作用。其中Hippo通路中的Hippo首次發(fā)現(xiàn)于果蠅遺傳功能篩選實驗中，Hippo是一條較為穩(wěn)定的信號傳導(dǎo)途徑。最近幾年研究發(fā)現(xiàn)，hippo通路的異常狀態(tài)及其下游的TAZ基因的過度激活被認(rèn)為有促上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用，在腫瘤發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中有重要作用。所以，我們擬通過

4、檢測非小細(xì)胞肺癌患者血中不同分型循環(huán)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量及其上TAZ基因的表達(dá)，結(jié)合患者臨床數(shù)據(jù)及手術(shù)操作的進(jìn)行分析，為評估非小細(xì)胞肺癌患者病情和評價手術(shù)效果提供良好依據(jù)。
　　目的：
　　本研究首次采用廣州益善生物技術(shù)股份有限公司開發(fā)的CanPatrolTM循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測技術(shù)，通過RNA探針對收集的循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行基因核酸定位，從而對收集到的細(xì)胞進(jìn)行分型和鑒定。在鑒別過程中，創(chuàng)新性地加入了波形蛋白和扭曲蛋白的序列，使得可以完全

5、分離出循環(huán)腫瘤細(xì)胞中的間質(zhì)型細(xì)胞和雙表型細(xì)胞。我們就可以分別計數(shù)不同的循環(huán)腫瘤細(xì)胞，聯(lián)系臨床病理數(shù)據(jù)對患者的病情進(jìn)行評估。同樣的，我們在捕獲的循環(huán)腫瘤細(xì)胞上檢測了與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化有關(guān)的腫瘤基因TAZ的表達(dá)，根據(jù)不同臨床病理學(xué)信息下TAZ基因陽性率的不同，來進(jìn)一步評估患者的病情。
　　方法:
　　選擇南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院胸外科確診可行手術(shù)根治性切除的非小細(xì)胞肺癌病人39例，分別于術(shù)前第一天和術(shù)后第五天分別抽取外周靜脈血液5m

6、l。后使用RNA探針技術(shù)檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞的分型及其上TAZ基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.早期非小細(xì)胞肺癌患者血中即有循環(huán)腫瘤細(xì)胞，陽性率為89.5％。
　　2.上皮型循環(huán)腫瘤細(xì)胞隨著非小細(xì)胞肺癌TNM分期的上升逐漸上升，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義(0.5vs.1.5vs.5.0，P=0.037)。
　　3.TAZ基因在EGFR野生型非小細(xì)胞肺癌患者的循環(huán)腫瘤細(xì)胞上的陽性率顯著高于EGFR突變型非小細(xì)胞肺癌患者(49.1

7、％vs.29.8％，P=0.047)。
　　4.TAZ基因的陽性率在縱隔淋巴結(jié)陽性(49.1％vs.29.8％，P=0.047)、高TNM分期(49.1％vs.29.8％，P=0.047)、CEA異常(60.0％vs.22.7％，P=0.014)和NSE(63.8％vs.47.0％，P=0.042)異常的非小細(xì)胞肺癌病人中更高。
　　5.根治性手術(shù)前后相比TAZ基因的陽性率有所下降。
　　6.我們使用在線工具(http