原子力顯微鏡對(duì)生物大分子的研究.pdf

1、對(duì)生物大分子立體結(jié)構(gòu)和形態(tài)的認(rèn)識(shí)是我們進(jìn)一步了解其功能和探討生命現(xiàn)象的重要基礎(chǔ)。原子力顯微鏡（AFM）測(cè)定具有高分辨率和直觀可視化的特點(diǎn)，它的樣品制備簡(jiǎn)單，不需要經(jīng)過(guò)脫水、抽真空、染色、包埋等這些會(huì)使生物分子結(jié)構(gòu)發(fā)生一定改變的復(fù)雜處理過(guò)程，并可對(duì)生物分子在近生理?xiàng)l件下檢測(cè)它們的動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)信息。這些特點(diǎn)使得它成為研究生物大分子的結(jié)構(gòu)及對(duì)其功能影響方面理想的分析檢測(cè)工具。因此，自誕生之日起，就被迅速應(yīng)用到了生物學(xué)領(lǐng)域。 本論文利用AF

2、M對(duì)細(xì)胞色素C分子的形態(tài)和積聚過(guò)程進(jìn)行了觀察，并對(duì)核酸分子探針（鉻天青S、溴酚藍(lán)）－十六烷基三甲基溴化銨－脫氧核糖核酸這兩個(gè)體系的作用方式和共振光散射法對(duì)核酸的測(cè)定機(jī)理進(jìn)行了研究，其內(nèi)容主要體現(xiàn)在以下三個(gè)方面： 1. 用AFM對(duì)不同濃度溶液中細(xì)胞色素C分子的存在形態(tài)，以及加入降聚劑和變性劑脲后細(xì)胞色素C分子的形態(tài)變化進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示，低濃度溶液中細(xì)胞色素C分子主要以類球形單體形式存在。濃度較高時(shí)，細(xì)胞色素C分子發(fā)生聚集，在一

3、定濃度范圍內(nèi)，細(xì)胞色素C的聚集體隨著濃度的提高而增大。加入較高濃度的脲，對(duì)細(xì)胞色素C的聚集具有明顯的降聚作用。對(duì)單體和聚集體的三維尺寸進(jìn)行了測(cè)量和分析。 2. 用AFM對(duì)細(xì)胞色素C在溫水浴中的積聚過(guò)程以及一些外部因素對(duì)積聚作用的影響進(jìn)行了研究，對(duì)細(xì)胞色素C積聚的不同階段形成的積聚物形態(tài)進(jìn)行了觀察。結(jié)果表明細(xì)胞色素C分子間有著較強(qiáng)的相互作用，能自發(fā)地在水溶液中進(jìn)行積聚，形成有規(guī)則的螺旋狀纖維積聚體。并且其積聚過(guò)程受外部環(huán)境因素的影

4、響較大，一定濃度鹽離子的存在對(duì)細(xì)胞色素C的積聚具有協(xié)同效應(yīng)。對(duì)細(xì)胞色素C蛋白的積聚機(jī)理和積聚模型進(jìn)行了探討。 3.用原子力顯微鏡（AFM）考察了有機(jī)分子探針鉻天青S（chrome azurol S，CAS）-表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨（CTMAB）-脫氧核糖核酸（DNA）以及溴酚藍(lán)（Bromophenol blue，BPB）-CTMAB-DNA兩種核酸測(cè)定體系的作用方式，以此探討了這兩種體系的共振光散射法測(cè)定核酸的機(jī)理。結(jié)果