ITP患兒骨髓巨核細(xì)胞DNA倍體分布的測(cè)定及臨床意義.pdf

1、特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purptJra,ITP)是臨床上最常見(jiàn)的一種出血性疾病,臨床上可分為急性型(aITP)和慢性型(cITP)兩種.傳統(tǒng)的臨床分型主要依據(jù)主訴病程,病程小于6個(gè)月為aITP;大于6個(gè)月為cITP.然而因隱性病程的存在,這種臨床分型與實(shí)際出入較大,有不少初診定為alTP的患兒轉(zhuǎn)化成了cITP.目前不僅有大量研究表明兩者臨床上有區(qū)別,而且發(fā)病機(jī)理也存在差異,提示a

2、ITP與cITP可能是兩個(gè)不同的疾病,因此兩者治療上也有區(qū)別.根據(jù)回顧性資料,兒童cITP發(fā)病常常是不可預(yù)見(jiàn)的、隱性的、自發(fā)性的或是經(jīng)治療誘導(dǎo)后緩解的,其概率大概為30-80﹪,比成人高,這一發(fā)現(xiàn)對(duì)cITP的治療尤為重要.因此能夠在疾病早期即作出真正意義上的臨床分型對(duì)疾病的治療有重要的指導(dǎo)意義.現(xiàn)己證實(shí)ITP病人骨髓巨核細(xì)胞(Megakaryocytes,MKs)均存在不同程度的成熟障礙,導(dǎo)致DNA的倍體數(shù)目增加,伴或不伴有外周血血小板

3、平均體積的增大,然而DNA倍體數(shù)目增加在急慢性ITP病人中有沒(méi)有區(qū)別,能否早期預(yù)測(cè)ITP的發(fā)展過(guò)程?骨髓巨核細(xì)胞多倍體化程度與血小板平均體積有沒(méi)有相關(guān)性?目前,有關(guān)研究少見(jiàn)報(bào)道. 因此闡明巨核細(xì)胞多倍體化程度、血小板平均體積與ITP的病程關(guān)系,探討ITP患兒的預(yù)后性指標(biāo)的選取與確立,有助于在初診時(shí)即作出臨床分型提供理論和實(shí)驗(yàn)室依據(jù). 對(duì)象和方法； (1)我院ITP患兒26例,其中alTPl6例,cITP10例,均符合19

4、98年全國(guó)小兒血液學(xué)會(huì)議診斷標(biāo)準(zhǔn)<'[1]>,年齡2個(gè)月-13歲,標(biāo)本收集均于aITP患兒治療前、eITP患兒停藥物治療1月后留取.正常對(duì)照組兒童8例(為無(wú)血液系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)疾病者),年齡1.5歲-10歲.(2)EDTA試管留取外周血2-3ml,血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血小板計(jì)數(shù)、血小板平均體積;常規(guī)做骨髓涂片,瑞氏染色,進(jìn)行巨核細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察;無(wú)菌抽取骨髓1.5ml-3ml注入改良的PBS中,Percoll密度梯度分離法分離提取骨髓巨核細(xì)胞,

5、對(duì)骨髓巨核細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞膜特異性抗原CD<,42a>和DNA雙色熒光標(biāo)記,FACS流式細(xì)胞儀檢測(cè)巨核細(xì)胞染色體數(shù)目,觀察巨核細(xì)胞倍體分布情況;aITP患兒自發(fā)病后至少隨訪6個(gè)月以上,cITP患兒及正常兒童不作隨訪. 結(jié)果；16例aITP患兒,有3例病程超過(guò)了6個(gè)月,轉(zhuǎn)化成了cITP.試驗(yàn)結(jié)果為13例aITP患兒、10例cITP患兒作回顧性分析后所得. (1)骨髓巨核細(xì)胞染色體倍體數(shù)目與病程:巨核細(xì)胞經(jīng)雙色熒光標(biāo)記后流式細(xì)胞

6、儀檢測(cè)顯示:正常對(duì)照組骨髓巨核細(xì)胞DNA分布以16N及32N為主,其次為8N及4N細(xì)胞;ITP患兒骨髓巨核細(xì)胞DNA分布仍以16N及32N為主,但2N、4N、8N細(xì)胞總數(shù)所占比例下降,32N及以上細(xì)胞總數(shù)所占比例升高,二者有顯著差異(p<0.05).aITP、cITP骨髓巨核細(xì)胞DNA倍性分布:2N、128N有明顯差異(p<0.01).(2)骨髓涂片巨核細(xì)胞形態(tài)觀察與病程:ITP患兒骨髓巨核細(xì)胞存在成熟障礙,幼稚及顆粒巨核細(xì)胞所占百分比

7、與正常兒童相比有顯著差異性(p<0.05).aITP、cITP患兒間巨核細(xì)胞形態(tài)無(wú)顯著差異(p>0.05).(3)外周血小板相關(guān)指標(biāo)與病程:aITP、cITP患兒間外周血小板計(jì)數(shù)存在明顯差異(p<0.05),血小板平均體積存在明顯差異(P<0.05).aITP血小板計(jì)數(shù)較低(≤20×10<'9>/L),血小板平均體積亦低(≤8f1);cITP血小板計(jì)數(shù)較高(≥20×10<'9>/L),血小板平均體積亦高(≥9f1). 結(jié)論