基于血小板活化研究去脂軟肝方防治大鼠早期脂肪肝的作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　 探討實(shí)驗(yàn)性大鼠早期非酒精性脂肪肝與血小板活化的關(guān)系；探討去脂軟肝方抗血小板活化的作用及其對(duì)非酒精性脂肪肝疾病發(fā)生發(fā)展的影響，以探明去脂軟肝方在非酒精性脂肪肝發(fā)病中的防治作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.模型制備：SD雄性大鼠78只，隨機(jī)分成3組，正常組24只大鼠以普通飼料喂養(yǎng)，模型組27只和用藥組27只大鼠以高脂飼料(普通飼料基礎(chǔ)上加10％豬油，2％膽固醇。送與加工廠生產(chǎn)加工)喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由飲

2、水，分籠飼養(yǎng)于云南中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房，各實(shí)驗(yàn)組分別于實(shí)驗(yàn)4周末、8周末、12周末分批次剖殺取材，進(jìn)行動(dòng)態(tài)指標(biāo)觀察。
　　 2.分組給藥：自造模之日起，正常組和模型組大鼠予生理鹽水灌胃1ml·200g-1，每日1次，去脂軟肝方用藥組按臨床等效量換算，予去脂軟肝方湯藥灌胃1ml·200g-1，每日1次。
　　 3.指標(biāo)檢測(cè)：造模4周末、8周末、12周末，分別取大鼠血樣及肝組織標(biāo)本，測(cè)定大鼠體重、肝臟濕重、計(jì)算肝體重比指數(shù)。蘇木精

3、-伊紅(HE)染色觀察肝臟脂肪變性情況。測(cè)定大鼠血清肝功能[丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)]、血脂[總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)]、肝脂、血小板聚集率及血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素Fla(6-Keto-PGFla)、P-選擇素(CD62p)。
　　 結(jié)果：
　　 1.一般情況：與正常組比較，模型組大鼠體重增長(zhǎng)較明顯，4周末模型組部分大鼠復(fù)出現(xiàn)食欲下降，行動(dòng)活躍性下降，大便粘軟

4、偶有稀溏，色淡黃等現(xiàn)象。部分大鼠復(fù)出現(xiàn)食欲下降，行動(dòng)活躍性下降，大便粘軟偶有稀溏，色淡黃等現(xiàn)象。8周末模型組大鼠體重高于正常組和用藥組(P<0.05)，12周末模型組大鼠體重繼續(xù)高于正常組和用藥組，且高于4周末模型組和8周未模型組大鼠的體重(P<0.05)。8周末模型組大鼠肝濕重高于正常組和用藥組(P<0.05)，且高于4周末模型組大鼠肝濕重(P<0.05)，12周末模型組大鼠的肝濕重升高更為明顯。
　　 2.形態(tài)學(xué)改變：與正常

5、組比較，8周末模型組大鼠肝臟病理學(xué)HE染色光鏡下可見(jiàn)超過(guò)1/3的肝細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)大小不一的圓形脂滴空泡。12周末模型組切片可見(jiàn)超過(guò)2/3的肝細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)大小不一的圓形脂滴空泡，部分標(biāo)本可見(jiàn)肝細(xì)胞腫大，胞漿疏松呈網(wǎng)狀、胞漿疏松化，嚴(yán)重者胞漿幾乎完全氣球樣變。
　　 3.生化指標(biāo)：與正常組含量相比，4周末，模型組大鼠血清TG升高，(P<0.05)；12周末，模型組與正常組和用藥組相比，血清TG升高，且高于8周末模型組(P<0.05

6、)。8周末模型組大鼠血清TC含量高于正常組和用藥組(P<0.05)，12周末模型組含量高于正常組和用藥組(P<0.05)。
　　 大鼠肝脂含量，12周末模型組大鼠肝臟TG含量較正常組和用藥組高(P<0.05)；8周末模型組大鼠肝臟TC含量較正常組和用藥組高(P<0.05)，12周末模型組較正常組和用藥組高(P<0.05)。
　　 大鼠血清轉(zhuǎn)氨酶，4周末模型組大鼠血清AST高于正常組和用藥組(P<0.05)。8周末模型組大

7、鼠血清ALT高于正常組和用藥組(P<0.05)，且高于4周末大鼠血清ALT含量(P<0.05)；12周末模型組大鼠血清ALT高于正常組和用藥組(P<0.05)，且高于4周末和8周末大鼠血清ALT含量(P<0.05)。
　　 大鼠血小板聚集率4周末模型組高于正常組和用藥組(P<0.05)；8周末模型組高于正常組和用藥組(P<0.05)，且高于4周末模型組大鼠血小板聚集率(P<0.05)；12周末模型組高于正常組和用藥組(P<0.0

8、5)，且高于4周末和8周末模型組大鼠血小板聚集率(P<0.05)。
　　 大鼠血清血栓素B2含量4周末模型組較正常組和用藥組高(P<0.05)；8周末大鼠血清血栓素B2模型組較正常組和用藥組模型組高(P<0.05)，且高于4周末模型組大鼠血清血栓素B2含量；12周末大鼠血清血栓素B2模型組較正常組高(P<0.05)，且高于4周末模型組和8周末現(xiàn)在組大鼠血清血栓素B2含量。
　　 大鼠血清6-Keto-PGFla含量4周末

9、模型組較正常組和用藥組低(P<0.05)；8型組(P<0.05)。12周末用藥組高于8周末和4周末用藥組(P<0.05)。
　　 大鼠血清CD62p含量8周末模型組較正常組和用藥組高(P<0.05)；12周末模型組較正常組和用藥組高(P<0.05)，且高于8周末和4周末模型組(P<0.05)。12周末用藥組低于8周末用藥組含量(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.實(shí)驗(yàn)性高脂飼料誘導(dǎo)的大鼠早期脂肪肝模型病理形

10、態(tài)改變?cè)?周末形成，表現(xiàn)為8周末，模型組大鼠肝臟HE染色，可見(jiàn)超過(guò)1/3的肝細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)大小不一的圓形脂滴空泡，有的空泡融合將細(xì)胞核擠向胞膜下。12周末肝臟脂肪變更明顯。
　　 2.實(shí)驗(yàn)性高脂飼料誘導(dǎo)的大鼠早期脂肪肝模型生化指標(biāo)在4周末成升高趨勢(shì)。表現(xiàn)為4周末，模型組大鼠血清轉(zhuǎn)氨酶升高，肝功能損傷，血脂升高，肝脂升高。8周末、12周末更為明顯。綜合結(jié)論1表明本實(shí)驗(yàn)造模成功。
　　 3.實(shí)驗(yàn)性高脂飼料誘導(dǎo)的大鼠早期脂肪肝

11、模型存在血小板活化。表現(xiàn)為4周末，模型組大鼠血小板聚集率升高、血栓素B2升高、6-Keto-PGFla降低、以及CD62p升高。8周末、12周末更為明顯。表明高脂飼料誘導(dǎo)的大鼠早期脂肪肝的發(fā)生發(fā)展和血小板活化存在一定的聯(lián)系。
　　 4.實(shí)驗(yàn)使用的中藥湯劑去脂軟肝方可顯著改善高脂飼料誘導(dǎo)的模型大鼠早期脂肪肝的發(fā)生發(fā)展，對(duì)于降低血清和肝臟總膽固醇、甘油三酯效果明顯，可逆轉(zhuǎn)肝功能損傷以及抑制血小板活化，從而防治實(shí)驗(yàn)性高脂飼料誘導(dǎo)的大鼠