中國(guó)大頭蛙群系統(tǒng)關(guān)系研究及大頭蛙和脆皮大頭蛙線粒體全基因組測(cè)序.pdf

1、本文由文獻(xiàn)綜述和研究報(bào)告兩個(gè)部分組成：
　　一、文獻(xiàn)綜述
　　對(duì)大頭蛙屬動(dòng)物和大頭蛙屬分類地位的相關(guān)研究進(jìn)行了概述，包括大頭蛙屬中國(guó)產(chǎn)大頭蛙三個(gè)物種的形態(tài)、習(xí)性、分類及細(xì)胞生物學(xué)和核酸水平的研究。發(fā)現(xiàn)大頭蛙屬動(dòng)物染色體數(shù)目出現(xiàn)多樣性，及Emerson et al.(2000)和 Evanset al.(2003)將采集的大頭蛙屬30多個(gè)種暫分為四大群，其中，中國(guó)大頭蛙群只列出了臺(tái)灣產(chǎn)大頭蛙一種。
　　二、研究論文

2、>　　1、分別測(cè)定了福建大頭蛙5個(gè)居群、大頭蛙2個(gè)居群和脆皮大頭蛙1個(gè)居群的多個(gè)個(gè)體12S和16S rRNA部分基因，選取每個(gè)居群內(nèi)序列差異大于0.5％的兩條序列，采用NJ法和MP法，構(gòu)建了大頭蛙屬中國(guó)大頭蛙群各居群間的系統(tǒng)進(jìn)化樹；從Genbank中下載了30多個(gè)大頭蛙屬其他物種的相應(yīng)序列，以近源種澤陸蛙、虎紋蛙、倭蛙、棘蛙為外群，采用MP法和ML法重建了大頭蛙屬分子系統(tǒng)樹。結(jié)果表明：中國(guó)大頭蛙群三個(gè)種均為有效種；支持費(fèi)梁對(duì)大頭蛙屬中國(guó)

3、大頭蛙群的劃分；推測(cè)中國(guó)大頭蛙群為大頭蛙屬的“第五群”。
　　2、將已測(cè)定的澤陸蛙、黑斑蛙、非洲爪蟾的mt DNA全序列進(jìn)行軟件比較分析，設(shè)計(jì)了20對(duì)引物，對(duì)大頭蛙屬大頭蛙（產(chǎn)于云南）進(jìn)行了全序列的擴(kuò)增、測(cè)序和拼接，獲得大頭蛙線粒體基因組全序列并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。大頭蛙線粒體基因組全序列全長(zhǎng)為16867bp，并登陸GenBank，登陸號(hào)為：AY899241。運(yùn)用DNASTAR、Sequin3.0、tRNA Scan-SE1.21

4、等軟件，對(duì)其進(jìn)行了各基因定位，發(fā)現(xiàn)大頭蛙線粒體基因組包括19個(gè)tRNA基因、2個(gè)rRNA基因、13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因和1個(gè)D-loop區(qū)。在定位的19個(gè)tRNA基因中，有兩個(gè)重復(fù)拷貝的tRNA-Met；與一般脊椎動(dòng)物線粒體相比，有4個(gè)tRNA基因缺失，其中編碼tRNA-Cys和 tRNA-Glu基因的相應(yīng)序列突變成了假基因，如此多的基因缺失在脊椎動(dòng)物中還是首次報(bào)道；同時(shí)發(fā)現(xiàn) tRNA-Ser(AGY)、ND5和ND6三個(gè)基因間間出現(xiàn)85b

5、p和63bp的基因間間隔。
　　3、采用同樣的引物和方法，測(cè)定了脆皮大頭蛙（產(chǎn)于海南）線粒體基因組全序列，其全長(zhǎng)為16640bp，并登錄GenBank，登錄號(hào)為AY899242。運(yùn)用DNASTAR、Sequin3.0、tRNA Scan-SE1.21等軟件，對(duì)各基因進(jìn)行了定位，其中包括17個(gè)tRNA基因（同樣具有兩個(gè)一前一后tRNA-Met的重復(fù)拷貝）、2個(gè)rRNA基因、13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因和1個(gè)D-loop區(qū)。與一般脊椎動(dòng)物線粒