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文檔簡介
1、目的:NPC-Astro和Olig2PC-Astro是采用基因敲入技術(shù)(knock in)從人的胚胎干細(xì)胞(hESCs)誘導(dǎo)分化而來的兩種新型的未成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞,小鼠脊髓T10全橫斷后在損傷處分別移植這兩種星形膠質(zhì)細(xì)胞,研究細(xì)胞移植對損傷區(qū)域形成的作用;對損傷兩側(cè)神經(jīng)元存活的影響;觀察細(xì)胞移植對脊髓上、下行投射神經(jīng)軸突再生的作用;對神經(jīng)環(huán)路的重建和對后肢運動功能恢復(fù)的作用;同時也為進(jìn)一步探究NPC-Astro和Olig2PC-Astr
2、o這兩種星形膠質(zhì)細(xì)胞的特性提供一定的線索。
方法:首先體外培養(yǎng)NPC-Astro和Olig2PC-Astro,運用細(xì)胞免疫熒光鑒定這兩種星形膠質(zhì)細(xì)胞,觀察兩種細(xì)胞在培養(yǎng)狀態(tài)下的形態(tài)和差別。對6-8周齡的C57BL/6小鼠做脊髓 T10節(jié)段的全橫斷模型,脊髓損傷后一天在損傷處分別移植這兩種細(xì)胞。損傷后四周取材冰凍切片,運用免疫熒光染色觀察 NPC-Astro和Olig2PC-Astro移植后的存活、分布、與宿主組織的整合以及向損
3、傷頭端和損傷尾端的遷移情況。損傷后四周進(jìn)行感覺神經(jīng)軸突的標(biāo)記。損傷后六周取材切片,運用免疫熒光染色研究細(xì)胞移植對損傷區(qū)域形成的作用、對損傷兩側(cè)神經(jīng)元的保護作用和對感覺神經(jīng)軸突再生的作用。損傷后十周運用免疫熒光染色研究細(xì)胞移植對不同類型神經(jīng)軸突再生的作用以及再生軸突與損傷尾端的神經(jīng)元有無突觸重建。小鼠脊髓損傷后定期進(jìn)行曠場實驗,運用BMS評分評估后肢運動功能的恢復(fù)情況
結(jié)果:NPC-Astro和Olig2PC-Astro在培養(yǎng)狀
4、態(tài)下都表達(dá)星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)記物GFAP和S100β,都可以用hM抗體進(jìn)行體外和在體的標(biāo)記,兩種細(xì)胞在培養(yǎng)狀態(tài)下形態(tài)存在一定的差別;細(xì)胞移植后4周可見兩種星形膠質(zhì)細(xì)胞在脊髓損傷處大量存活并與宿主組織整合在一起,移植的細(xì)胞可以向損傷頭端和尾端進(jìn)行遷移;與對照組相比,NPC-Astro和Olig2PC-Astro移植后損傷區(qū)域面積顯著減??;兩種細(xì)胞對損傷兩側(cè)的神經(jīng)元有顯著的保護作用,其中Olig2PC-Astro的神經(jīng)元保護作用強于NPC-A
5、stro;neurofilament抗體免疫熒光染色表明損傷頭端和尾端都有神經(jīng)軸突再生進(jìn)入損傷區(qū)域,部分神經(jīng)軸突甚至穿過損傷區(qū)域到達(dá)損傷對側(cè);我們還觀察到了脊髓損傷后上行的感覺神經(jīng)軸突和下行的5-HT能神經(jīng)軸突可以再生,再生的5-HT能神經(jīng)軸突可以穿過損傷區(qū)域并且與損傷尾端多種類型的神經(jīng)元形成新的突觸聯(lián)系;曠場實驗顯示細(xì)胞移植小鼠后肢的運動功能得到了恢復(fù)。
結(jié)論:NPC-Astro和Olig2PC-Astro移植后大量存活,與
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