三種鱉線粒體DNA部分基因序列的比較分析和分子鑒定標(biāo)記.pdf

1、　　本文利用線粒體DNA分子標(biāo)記技術(shù)研究了中華鱉、砂鱉和山瑞鱉線粒體DNA部分基因的序列并進(jìn)行了比較分析，在分子水平證實(shí)了砂鱉為鱉屬一新種并獲得了這三種鱉各自的分子鑒定標(biāo)記，主要結(jié)論如下：　　(1)對(duì)中華鱉、砂鱉線粒體DNA12SrRNA基因片段進(jìn)行了序列測(cè)定和PCR-RFLP分析。結(jié)果表明：中華鱉、砂鱉線粒體DNA12SrRNA基因片段的堿基序列長(zhǎng)度相同，均為562bp，其A、T、C、G含量相似，兩序列間共有13處堿基不同，序列差異

2、率為2.31﹪，而中華鱉與砂鱉各自個(gè)體間的平均序列差異率分別為0.53﹪和0.36﹪，種間差異顯著；用內(nèi)切酶MspⅠ酶切兩種鱉的12SrRNA基因片段，在砂鱉中可得到大小為519bp和43bp兩個(gè)片斷，而中華鱉無(wú)此酶切位點(diǎn)，這可作為準(zhǔn)確鑒別中華鱉和砂鱉的分子鑒定標(biāo)記。(2)對(duì)三種鱉線粒體DNA兩個(gè)rRNA基因全序列核苷酸差異率的分析表明：中華鱉與砂鱉12SrRNA基因序列間的差異率為4.0﹪，中華鱉、山瑞鱉間的序列差異率為11.0﹪，砂

3、鱉、山瑞鱉間的序列差異率為10.8﹪；中華鱉與砂鱉16SrRNA基因全序列的差異率為4.0﹪，中華鱉、山瑞鱉間的序列差異率為13.2﹪，砂鱉、山瑞鱉間的序列差異率為12.8﹪?；谌N鱉mtDNA12SrRNA、16SrRNA基因全序列的系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果均支持砂鱉為鱉屬一新種。(3)對(duì)中華鱉、砂鱉和山瑞鱉線粒體DNA細(xì)胞色素b基因進(jìn)行了序列測(cè)定、序列的比較分析、系統(tǒng)進(jìn)化分析和PCR-RFLP分析。結(jié)果表明中華鱉、砂鱉與山瑞鱉線粒體DNA

4、Cytb基因的序列全長(zhǎng)相同，均為1140bp，其A、C、G、T含量相似。序列間的差異率分析表明：中華鱉與砂鱉此基因序列間的差異率為7.7﹪，中華鱉、山瑞鱉間的序列差異率為15.0﹪，砂鱉、山瑞鱉間的序列差異率為15.9﹪，種間差異顯著，且中華鱉與砂鱉的差異率相對(duì)較小。PCR-RFLP分析表明：用內(nèi)切酶NdeⅠ可準(zhǔn)確鑒別砂鱉，而用內(nèi)切酶BamHⅠ則可準(zhǔn)確鑒別山瑞鱉。內(nèi)切酶NdeⅠ和BamHⅠ的聯(lián)用分析，可使這三種鱉在分子水平都得到明確的鑒