江西省野生蕙蘭遺傳多樣性的ISSR分析.pdf

1、本課題采用ISSR分子標記對江西省蕙蘭(CymbidiumfaberiRolfe)的遺傳多樣性進行了分析,目的在于了解蕙蘭居群的遺傳多樣性水平、遺傳結(jié)構(gòu)以及居群間的遺傳分化,并提出了相應的保護措施,為合理開發(fā)利用和保護蕙蘭資源提供了科學的指導和依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　 用正交設計法建立了蕙蘭ISSR-PCR最佳反應體系和擴增程序。最佳反應體系:25μlPCR反應的體積中,2.5μl10×PCRbuffer,2.5mmol/

2、LMg2+,120ng模板DNA,200μmol/LdNTPs,0.75UTaqDNA聚合酶,0.4.μmol/L引物,雙蒸水15.35μl;最佳擴增程序為:94℃預變性5min,然后進行40個循環(huán):94℃變性45s,復性(溫度根據(jù)各引物的Tm值篩選得到)45s,72℃延伸80s,循環(huán)結(jié)束后72℃延伸7min,4℃保存。
　　 篩選出12條引物對255個樣品進行擴增,得到142條譜帶,其中多樣性條帶為129條,多態(tài)性條帶百分率為

3、90.85％。用POPGENE軟件分析結(jié)果表明,蕙蘭物種水平的遺傳多樣性(PPF-90.85%,Hpop=0.2892,I=0.4393)和居群水平的遺傳多樣性(PPF=59.4.0%,Hpop=0.1886,I=0.2865)都較高。其中,南豐居群(NF)的遺傳多樣性最高(PPF=73.94%,Hpop=0.2498,I=0.3764);貴溪居群(GX)的遺傳多樣性最低(PPF=45.77%,Hpop=0.1327,I=0.2053)

4、。
　　 用POPGENE軟件計算Nei’s遺傳距離(D)和遺傳相似性系數(shù)(I)。結(jié)果顯示17個居群兩兩之間的遺傳距離(D)和遺傳相似性系數(shù)(I)的變化范圍為0.0278～0.24.76和0.7807～0.9726。其中貴溪(GX)居群和資溪(ZX)居群之間的遺傳距離最小(0.0278);XS居群和SC居群之間的遺傳距離最大(0.2476)。用NTSYS-pc軟件對Nei’s遺傳距離進行UPGMA聚類,結(jié)果顯示蕙蘭分為兩個譜系(

5、Ⅰ和Ⅱ)。譜系Ⅰ又分為兩個分支,第一分支是貴溪(GX)和資溪(ZX)居群先聚類,再依次與靖安(JA)、廬山(LS)、玉山(YS)居群聚在一起;第二個分支先分成兩個小分支:南豐(NF)和邵武(SW)居群聚類后與石城(SC)居群聚類形成第一小分支;井岡山(JGS)與崇義(CY)居群先聚類,再依次與會昌(HC)、安福(AF)居群聚在一起形成第二小分支。在譜系Ⅱ中修水(XS)和武寧(WN)先聚類,再依次與橫豐(HF)、銅鼓(TG)、宜豐(YF)

6、居群聚在一起。
　　 用AMOVA軟件分析顯示,蕙蘭居群間遺傳分化系數(shù)stΦ,為0.362,表明江西蕙蘭居群間的遺傳分化小于居群內(nèi)的遺傳分化。各大山脈居群間的遺傳分化系數(shù)從小到大依次為:羅霄山脈3個居群間Φst=0.189、武夷山脈6個居群間Φst=0.313、幕阜山脈3個居群間Φst=0.386、懷玉山脈2個居群間Φst=0.417、九嶺山脈3個居群間Φst=0.423,即各大山脈居群的居群間遺傳分化均小于居群內(nèi)遺傳分化。與P