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文檔簡介
1、目的:
通過體外分離豚鼠前列腺、切片、體外分離培養(yǎng)前列腺Cajal間質細胞(ICCs)及雙標免疫熒光從組織學及細胞學角度觀察α1腎上腺素受體在前列腺上的表達,探究α1-腎上腺素受體在豚鼠前列腺ICCs上的表達及其生理意義,為深入研究前列腺增生癥、慢性前列腺炎及早泄等與前列腺平滑肌功能紊亂的相關疾病奠定基礎。
方法:
本課題以成年豚鼠前列腺ICC為研究對象。制作豚鼠前列腺組織冰凍切片及體外培養(yǎng)的豚鼠前列腺細胞
2、進行雙重免疫熒光染色,使用酪氨酸激酶受體(c-Kit)作為ICCs的標記物,α肌動蛋白(α-actin)標記平滑肌細胞,分別進行c-Kit與α1-腎上腺素受體、α-actin與α1-腎上腺素受體配對的免疫熒光雙標記染色。
結果:
豚鼠前列腺組織經切片、雙標免疫熒光染色后,c-Kit染色陽性的ICCs分布于平滑肌之間,c-Kit與α1-腎上腺素受體抗體在ICCs上均染色陽性,平滑肌上α1-腎上腺素受體染色陽性。且ICC
3、s上α1-腎上腺素受體染色明顯較平滑肌上α1-腎上腺素受體染色深。體外分離培養(yǎng)的前列腺ICCs呈梭形或星形,分布于平滑肌中,細胞相對于平滑肌細胞較小,ICCs借細胞兩側突起與周邊 ICC或SMC連接在一起呈網狀分布。體外分離培養(yǎng)的豚鼠前列腺ICCs,染色后置于激光共聚焦顯微鏡下觀察,ICCs上同時存在c-Kit受體與α1-腎上腺素受體。此外,體外分離培養(yǎng)的前列腺ICCs占混合細胞培養(yǎng)的少數,絕大多數細胞為前列腺平滑肌細胞,其細胞相對于I
4、CCs較大,其形態(tài)多樣,倒置顯微鏡下很容易與ICCs細胞鑒別,細胞多聚集在一起呈團塊狀。
結論:
?。?)前列腺ICCs上確實存在α1-腎上腺素受體。
?。?)α1-腎上腺素受體在前列腺ICCs上的表達明顯高于在前列腺平滑肌上的表達。
(3)前列腺ICCs與前列腺平滑肌形成“神經信號-ICCs-平滑肌”這一信號傳遞系統(tǒng)可能參與射精的調節(jié)過程,具體機制有待進一步研究。
(4)體外成功分離培養(yǎng)出
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