大蒜多糖抑制EB病毒早期抗原、衣殼抗原表達(dá)及核酸復(fù)制的體外研究.pdf

1、目的：探討大蒜多糖（Garlic polysaccharide，GPs）對(duì)EB病毒早期抗原（Earlyantigen，EA）和衣殼抗原（Capsid antigen，VCA）表達(dá)以及核酸復(fù)制的體外作用。
　　方法：采用CCK-8法分別檢測(cè)GPs作用于Raji細(xì)胞和B95-8細(xì)胞的安全藥物濃度。通過(guò)丁酸鈉（NaB，4.0 mM/mL）和巴豆油（CTO，500ng/ml）聯(lián)合誘導(dǎo)Raji細(xì)胞表達(dá)EB病毒EA和B95-8細(xì)胞表達(dá)VCA抗

2、原，采用間接免疫熒光（IIF）法觀察GPs對(duì)EA和VCA表達(dá)的影響；熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（qRT-PCR）檢測(cè)GPs對(duì)EB病毒裂解期關(guān)鍵誘導(dǎo)因子BZLF1表達(dá)的影響；同時(shí)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)Raji細(xì)胞凋亡情況，以驗(yàn)證該濃度的 GPs對(duì)細(xì)胞為安全濃度。Raji細(xì)胞為EB病毒I期潛伏感染，NaB/CTO可誘導(dǎo)EB病毒進(jìn)入裂解期復(fù)制，使用EB病毒核酸定量PCR試劑盒檢測(cè)GPs對(duì)EB病毒核酸復(fù)制的影響，并用qRT-PCR觀察其對(duì)核抗原

3、1（EBNA-1）表達(dá)的影響。結(jié)果：1、CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示：≤2.00mg/ml的GPs為Raji和B95-8細(xì)胞的安全濃度，且24，48和72h的安全濃度是一致的（P>0.05）。
　　2、在誘導(dǎo) EA表達(dá)的 Raji細(xì)胞中,與陽(yáng)性對(duì)照組相比，加入1mg/ml GPs組的EA抗原表達(dá)的抑制率為12.55％，2mg/ml時(shí)為62.70%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3、在誘導(dǎo)VCA表達(dá)的B95-8細(xì)胞中，

4、與陽(yáng)性對(duì)照組相比，加入1mg/ml GPs組的VCA抗原表達(dá)的抑制率為43.86%，2mg/ml時(shí)為66.92%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　4、在誘導(dǎo)EA表達(dá)的Raji細(xì)胞中檢測(cè)BZLF1 mRNA發(fā)現(xiàn)：1.00和2.00mg/ml的GPs對(duì)BZLF1表達(dá)的抑制率分別為4.86%（P>0.05）和19.44%（P<0.05）。
　　5、流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)1.00和2.00mg/ml的GPs均不引起Raji細(xì)胞凋亡

5、率增加，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明GPs確實(shí)對(duì)EB病毒EA和VCA的表達(dá)具有顯著的抑制作用。
　　6、EB病毒核酸檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：GPs對(duì)潛伏期和裂解期的核酸抑制率分別為60.27%和39.06%,對(duì) EBNA-1 mRNA的抑制率分別為38.7%和36.4%均具有顯著差異（P<0.05）。表明GPs對(duì)EB病毒核酸復(fù)制也有明顯的抑制作用。
　　結(jié)論：1、在Raji和B95-8細(xì)胞中，采用CCK-8法測(cè)定GPs的安全藥物