人血管內(nèi)皮生長因子受體-3胞外1-3區(qū)基因的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：1.血管內(nèi)皮生長因子受體-3基因的原核表達載體構(gòu)建；2.血管內(nèi)皮生長因子受體-3基因的原核融合表達。 方法：以本實驗室構(gòu)建的克隆質(zhì)粒為模板，設(shè)計合適引物，在上游引物中加入酶切位點和起始密碼，在下游引物中加入終止密碼和酶切位點，把上述VEGFR3擴增產(chǎn)物經(jīng)切膠回收純化后與pBV220質(zhì)粒經(jīng)雙酶切純化后的產(chǎn)物連接，把該質(zhì)粒命名為pBV220-VEGFR3,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，篩選出陽性菌株，溫控誘導(dǎo)表達，超聲破菌，對包涵體

2、進行洗滌純化.以pBV220-VEGFR3為模板通過PCR方法構(gòu)建C端含有HisTag的pBV220-VEGFR3his質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，用Western-blotting鑒定，用Ni2+-NTA樹脂柱對表達產(chǎn)物進行純化。 結(jié)果：構(gòu)建了pBV220-VEGFR3質(zhì)粒表達載體，SDS-PAGE電泳表明在大腸桿菌DH5α中成功表達出VEGFR3因子，同時構(gòu)建了pBV220-VEGFR3融合表達載體，SDS-PAGE電泳和

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