丹參活性部位提取分離及心肌保護(hù)作用評價.pdf

1、丹參（Salvia miltiorrhiza Bunge）為唇形科鼠尾草屬植物丹參干燥的根及根莖，具有非常廣泛的藥理作用，對冠心病，高血壓，心肌梗死等心腦血管疾病，效果顯著。我們熟知丹參中主要含有脂溶性丹參酮類和水溶性丹參酚酸類兩大類化學(xué)成分。研究表明，在水溶性成分中含有一定量的糖蛋白。本論文主要研究丹參四個活性部位（總丹參酮部位、丹參總酚酸部位、丹參總酚酸與粗糖蛋白混合部位及粗糖蛋白部位）的分離，首次對比評價各活性部位的心肌保護(hù)作用。

2、
　　1.丹參活性部位提取工藝研究利用閃式提取器提取，采用紫外分光光度法測定總丹參酮、丹參總酚酸的含量。最終確定最佳提取工藝：提取倍數(shù)為12倍，提取次數(shù)為3次，提取溶劑濃度為75％乙醇。將所得浸膏，加適量的蒸餾水溶解制成混懸液，經(jīng)石油醚萃取后，再利用石油醚-乙酸乙酯（3:1）萃取，濃縮、干燥得到總丹參酮部位（DSBW-1，總丹參酮含量為50.8%)；將剩余的水相部分濃縮、干燥，加入5倍體積的75%乙醇提取，提取液濃縮、干燥得到丹參

3、總酚酸與粗糖蛋白混合部位（DSBW-2，丹參總酚酸含量為40.8%，多糖含量20%）；將DSBW-2加入適量60%乙醇溶解，過濾，濾液加入95%乙醇進(jìn)行沉淀，4℃放置12 h，經(jīng)4000 r/min轉(zhuǎn)速離心5分鐘，收集上清液，減壓濃縮、干燥，得丹參總酚酸部位（DSBW-3，丹參總酚酸含量為54.3%）；收集沉淀，減壓濃縮、干燥，得粗糖蛋白部位（DSBW-4，多糖含量40.8%，蛋白質(zhì)含量為6.08%）。
　　2.丹參酚酸類物質(zhì)分離

4、工藝研究在課題組前期研究基礎(chǔ)上，選用弱極性的大孔吸附樹脂AB-8分離丹參酚酸類物質(zhì)，依次加入蒸餾水、5%、10%、20%甲醇等梯度洗脫。最終確定丹參素主要集中在水部位，迷迭香酸、丹參酚酸B主要集中在20%甲醇餾分中。將所得餾分通過硅膠柱處理，選擇洗脫劑乙酸乙酯-丙酮-10%甲酸（8:1:0.3）洗脫，分離得到丹參素、迷迭香酸及丹參酚酸B。
　　3.丹參各活性部位對大鼠胸主動脈血管環(huán)的作用研究游離大鼠胸主動脈血管環(huán)，加入去甲腎上腺素

5、使血管環(huán)收縮，張力值穩(wěn)定后給予低劑量濃度100μg/mL、中劑量濃度500μg/mL、高劑量濃度1 mg/mL的丹參四個活性部位，通過信號采集系統(tǒng)，記錄血管舒張百分比。結(jié)果顯示，在濃度為1 mg/mL時， DSBW-3舒張作用最強，血管舒張百分比為55.67±3.09%；DSBW-1作用強度次之，血管舒張百分比為47.33±2.62%。
　　4.丹參各活性部位對心肌細(xì)胞保護(hù)作用研究通過體外培養(yǎng)乳鼠的心肌細(xì)胞，建立缺血再灌注損傷模型

6、。給予濃度為2.5、5和10μg/mL的丹參四個活性部位作用于模型細(xì)胞，通過檢測細(xì)胞活力OD值，乳酸脫氫酶（LDH）含量及超氧化物歧化酶（SOD）含量，對比評價丹參四個活性部位對心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。研究結(jié)果表明，在藥物濃度為10μg/mL時，DSBW-1對心肌細(xì)胞保護(hù)作用最強，與模型組相比，對IRI細(xì)胞具有明顯的保護(hù)作用。
　　本論文通過研究丹參各活性部位的提取分離工藝，為充分開發(fā)利用資源奠定了一定的基礎(chǔ)；富集、分離丹參酚酸類物質(zhì)