內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體內(nèi)FKBP23與BiP結構域相互作用位點及FKBP23的X-射線晶體學研究.pdf

1、本文分為兩個部分：第一部分對小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體內(nèi)的親免蛋白FKBP23與免疫球蛋白結合蛋白BiP結構域相互作用位點進行了深入的研究；第二部分對FKBP23蛋白結晶條件的篩選和優(yōu)化進行了初步探索，并對與抗癌藥物篩選相關的四個金屬配合物的晶體結構進行了解析。
　　 FKBP23屬于遺傳上高度保守的親免蛋白家族；具有肽脯氨酰順反異構酶(PPIase)活性，是免疫抑制劑FK506和抗癌制劑雷帕霉素在哺乳動物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體內(nèi)的受體。本文研究的另一個蛋

2、白質(zhì)BiP是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體中的重要的Hsp70分子伴侶，參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體中所有已知的生物功能，包括蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)亞細胞結構間的轉運和折疊、信號轉導及Ca2+的動態(tài)平衡等。
　　 第一部分研究首先以克隆蛋白質(zhì)FKBP23與BiP為研究對象，采用基因定點突變結合PHase活性和ATPase活性檢測，首次將PPIase對標準多肽構象變化的催化活性與該類酶對天然全長蛋白構象的調(diào)控活性結合起來，證明了mBiP N端ATPase結構域上第117位脯氨

3、酸為mFKBP23 N端PPIase活性的底物位點。這一結論揭示了FKBP23作為具有結合ca+能力的分子伴侶，在調(diào)節(jié)BiP的ATPase活性時發(fā)揮了分子扳機的作用。這一調(diào)控機制與所有常見的調(diào)控系統(tǒng)完全不同，為肽脯氨酰順反異構酶充當分子開關這一全新功能提供了新的認識。此外，以克隆蛋白質(zhì)FKBP23與BiP的C端片段蛋白為研究對象，采用蛋白質(zhì)交聯(lián)、蛋白酶消化和RP-HPLC分離的方法，對含有兩種目標蛋白C端結構域結合位點序列的短肽進行了分