長(zhǎng)期低劑量納米二氧化鈦暴露誘導(dǎo)小鼠肝損傷的分子機(jī)制.pdf

1、近十年，由于納米技術(shù)的極速發(fā)展，越來(lái)越多的納米材料被開(kāi)發(fā)與利用，繼而用于生產(chǎn)并深入到人們生活的方方面面。納米二氧化鈦（TiO2）直徑于100 nm以下，外觀為白色的疏松粉末。具有抗紫外線（UV）、抗菌、自潔凈和抗老化性能，現(xiàn)可用于化妝品、食品、功能纖維、塑料、油墨、涂料、油漆、精細(xì)陶瓷等各個(gè)領(lǐng)域。正是由于納米 TiO2廣泛的應(yīng)用，其對(duì)人體以及環(huán)境的危害關(guān)注度也隨之日益加大。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，納米 TiO2可以通過(guò)呼吸吸入、口腔攝入甚至是皮膚

2、滲透等多種轉(zhuǎn)運(yùn)途徑進(jìn)入到機(jī)體內(nèi)部，再經(jīng)過(guò)循環(huán)系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)至機(jī)體的各個(gè)器官并在此沉積，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒性效應(yīng)。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)納米 TiO2導(dǎo)致小鼠肝功能損傷的分子機(jī)制的了解仍很有限。因此，本學(xué)位論文通過(guò)納米TiO2（銳鈦型5 nm）對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃處理來(lái)研究長(zhǎng)時(shí)間、低劑量的納米 TiO2對(duì)小鼠肝臟的影響，通過(guò)引發(fā)的體重、器體比和病理學(xué)現(xiàn)象以及生化指標(biāo)、蛋白表達(dá)的變化探討其對(duì)肝臟毒性的機(jī)制。本學(xué)位論文可為人類(lèi)進(jìn)一步安全、有效地使用納米材料提供重要的實(shí)

3、驗(yàn)依據(jù)。
　　本文的主要研究?jī)?nèi)容如下所述：
　?。?）本文通過(guò)三種不同的納米TiO2劑量（2.5、5、10 mg/kg BW）持續(xù)對(duì)小鼠進(jìn)行為期6個(gè)月的灌胃處理，詳細(xì)研究了納米TiO2對(duì)小鼠肝臟慢性損傷的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)納米 TiO2處理的小鼠的體重顯著下降，而小鼠的肝臟系數(shù)顯著增加（肝腫大）。與此同時(shí)，觀察小鼠肝臟的病理切片，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠表現(xiàn)出了嚴(yán)重的病變，如炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、血管擴(kuò)張、充血、肝組織縫隙擴(kuò)大以及肝細(xì)胞

4、漸進(jìn)性壞死等。并且通過(guò)透射電鏡（TEM）的觀察，肝細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出了明顯的凋亡現(xiàn)象，其中包括嚴(yán)重的線粒體腫脹、核膜崩解和染色質(zhì)邊緣化。此外，在實(shí)驗(yàn)組肝細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、線粒體和核膜中觀察到了黑色的顆粒聚集體。這也證明了納米 TiO2會(huì)在肝細(xì)胞中沉積。并且隨著納米 TiO2劑量的升高，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）和乳酸脫氫酶（LDH）的表達(dá)水平也逐漸上升。這充分說(shuō)明了長(zhǎng)期的低劑量納米TiO2暴露

5、也將會(huì)導(dǎo)致肝功能的損傷。本研究發(fā)現(xiàn)暴露于納米TiO2的小鼠其肝組織輔助性T細(xì)胞（Th2）型細(xì)胞因子白介素（IL-4）、IL-5和Th1型細(xì)胞因子IL-12的表達(dá)具有一個(gè)劑量依賴(lài)性的增加。與此相關(guān)聯(lián)的IL-4和IL-12靶基因，包括分泌干擾素（IFN）-γ、GATA3、GATA4、T-bet、信號(hào)轉(zhuǎn)錄因子及轉(zhuǎn)錄激活銀子（STAT）3、STAT6、趨化因子、單核細(xì)胞趨化因子（MCP）-1和巨噬細(xì)胞炎癥蛋白（MIP）-2都顯著上調(diào)，而STAT

6、1呈現(xiàn)出顯著下調(diào)的趨勢(shì)。這些結(jié)果顯示，納米TiO2誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝毒性與IL-4介導(dǎo)的通路激活有密切關(guān)系，也說(shuō)明了Th2型細(xì)胞可能參與了小鼠肝臟損傷。
　　（2）通過(guò)使用低劑量的納米TiO2（2.5、5、10 mg/kg BW）對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃處理，為時(shí)90天。用以研究 JAK-STAT通路可能參與納米TiO2暴露引起的小鼠肝臟損傷機(jī)制。發(fā)現(xiàn)隨著納米TiO2劑量的增加，肝組織中環(huán)氧酶（COX）、中性粒細(xì)胞明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白（NGAL）

7、和上皮中性粒細(xì)胞激活蛋白（ENA）-78的表達(dá)水平分別逐漸增加，而過(guò)氧化物酶增殖物激活受體（PPAR）-γ和過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子（PGC）-1的表達(dá)水平分別逐漸降低。內(nèi)皮素（ET）-1和嘌呤(P2X)受體P2X7在TiO2實(shí)驗(yàn)組中都沒(méi)有顯著的差異；JAK2、STAT3和IL-6的表達(dá)與其對(duì)照組相比，低、中、高三個(gè)劑量分別增加了2.19％、20.46%和32.7%;195.52%、335.72%和348.19%;61.6