冠心病患者TLR4-鋅指蛋白A20與血漿組織因子的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、背景:研究提示動(dòng)脈粥樣硬化(artherosclerosis，AS)是一種慢性炎癥性疾病，炎癥反應(yīng)的激活可能導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣斑塊不穩(wěn)定、破裂，并貫穿于冠心病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。急性冠狀動(dòng)脈綜合征(acutecoronarysyndrome，ACS)是冠狀動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊發(fā)生破裂出血，或在斑塊破裂基礎(chǔ)上啟動(dòng)外源性凝血系統(tǒng)，血栓形成引起冠狀動(dòng)脈不完全或完全阻塞。Toll樣受體(toll-likereceptorsTLRs)是一類(lèi)介導(dǎo)天然免疫的模式識(shí)

2、別受體，主要識(shí)別高度保守的結(jié)構(gòu)分子，即病原體相關(guān)分子模式(Pathogenassociatedmolecularpatterns，PAMPs)。Toll樣受體4(Tolllikereceptor4，TLR4)是Toll樣受體家族的一員;外周血單核細(xì)胞TLR4的激活可以通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生大量炎性細(xì)胞因子;TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在AS的起始、發(fā)展及斑塊破裂中起重要的作用。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)鋅指蛋白A20(zincfingerprote

3、in，A20)參與TLR4/NF-κB(核轉(zhuǎn)錄因子κB，nuclearfactorkappaB)信號(hào)通路的調(diào)控，終止TLR4誘導(dǎo)的NF-κB的激活。此外，冠心病患者的高凝狀態(tài)、凝血異?？赡芘c組織因子(TissueFactor,TF)、組織因子途徑抑制物(TissueFactorPasswayInhibitor,TFPI)系統(tǒng)的失衡有關(guān)，TLR4與TF在冠心病中的相互關(guān)系及A20的調(diào)控作用尚不明確。
　　 目的:1.觀察冠心病患者

4、外周血單個(gè)核細(xì)胞Toll樣受體4mRNA和鋅指蛋白A20mRNA表達(dá)的變化。2.檢測(cè)冠心病患者血漿組織因子、組織因子途徑抑制物濃度變化。3.探討TLR4介導(dǎo)的信號(hào)通路與凝血異常在冠心病尤其是ACS發(fā)病中的作用，分析其與冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度及斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系。
　　 方法:選擇52例確診冠心病的患者，其診斷根據(jù)典型的臨床表現(xiàn)、心肌酶學(xué)、心電圖等指標(biāo)，符合世界衛(wèi)生組織(WHO)關(guān)于冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有冠心病患者均行冠狀動(dòng)脈造影評(píng)價(jià)

5、冠狀動(dòng)脈狹窄程度;根據(jù)病史、實(shí)驗(yàn)室檢查及冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果將患者分為ACS組(31例)，其中急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction，AMI)15例，不穩(wěn)定型心絞痛(unstableanginapectoris，UAP)16例;穩(wěn)定型心絞痛(stableanginapectoris，SAP)組21例;對(duì)照組共入選20例。根據(jù)病變血管數(shù)目進(jìn)一步分為:單支病變組17例;雙支病變組15例;多支病變組20例。以上入選者均排

6、除嚴(yán)重感染（敗血癥、肺部感染）、嚴(yán)重肝腎功能衰竭、彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC)、惡性腫瘤和自身免疫性疾病及目前正在進(jìn)行抗凝、抗栓治療的患者。采集入選對(duì)象外周動(dòng)脈血，乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝，采用Ficoll法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，Trizol提取總RNA;上層血漿-70℃超低溫冰箱備用。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)(Real-timefluorescencequantitationpolymerasechainreaction

7、，RT-PCR)測(cè)定入選者的外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR4mRNA、A20mRNA表達(dá);采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linkedimmunsorbentassay,ELISA)測(cè)定TF、TFPI濃度;全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定所有入選者血脂水平。
　　 結(jié)果:1.ACS組、SAP組患者與對(duì)照組臨床基線資料比較，年齡、性別、TC、TG、HDL、LDL、ApoA和ApoB無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）;高血壓、糖尿病、吸煙冠

8、心病相關(guān)危險(xiǎn)因素相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);ACS組空腹血糖、TG高于對(duì)照組，而HDL低于對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。2.ACS組外周單個(gè)核細(xì)胞TLR4mRNA及A20mRNA(分別為0.49±0.16，0.02±0.01)的表達(dá)顯著高于SAP組(分別為0.19±0.09，0.09±0.03)及對(duì)照組(分別為0.13±0.03，0.08±0.04)(P＜0.001)。SAP組高于對(duì)照組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05

9、）。多支病變組TLR4、A20mRNA(分別為0.47±0.15，0.22±0.08)表達(dá)均高于單支病變組(分別為0.27±0.18、0.12±0.07)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.006;P=0.000)。3.ACS組血漿TF、TFPI(分別為22.79±1.49ng.L-1，22.50±1.87ug.L-1)水平高于SAP(分別為19.31±0.51ng.L-1，20.44±0.48ug.L-1)和正常對(duì)照組(分別為19.25±0.7

10、5ng.L-1，19.63±0.65ug.L-1)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）;多支病變組血漿TF水平高于單支病變組(分別為21.66±1.86ng.L-1，20.31±1.22ng.L-1)(P=0.017)。4.ACS外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR4mRNA表達(dá)與A20mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.640，P=0.002);外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR4mRNA表達(dá)與血漿TF呈正相關(guān)(r=0.716，P=0.000)。
　　 結(jié)論

11、:1.ACS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR4及A20的表達(dá)顯著高于SAP組及對(duì)照組。多支病變組TLR4、A20表達(dá)均高于單支病變組。提示冠心病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR4、A20mRNA表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度和粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性有關(guān)。2.ACS外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR4表達(dá)與A20表達(dá)呈正相關(guān)。ACS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR4表達(dá)與血漿TF呈正相關(guān)。提示TLR4介導(dǎo)的信號(hào)通路的激活可能參與ACS冠脈粥樣斑塊破裂、促進(jìn)凝血異常。3