N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊的制備及其抗大鼠肝纖維化作用的研究.pdf

1、本研究利用乳化交聯(lián)法制備N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊(NCSM)，優(yōu)化制備工藝，考察其制劑學(xué)和藥代動力學(xué)參數(shù)，進一步研究微囊口服給藥對大鼠肝纖維化的治療作用，并與N-乙酰半胱氨酸溶液和市售經(jīng)典抗肝纖維化藥物水飛薊賓口服給藥進行比較。
　　目的:N-乙酰半胱氨酸(NAC)作為谷胱甘肽的前體，其抗氧化性對肝纖維化病變的治療作用已日漸受到關(guān)注，目前臨床給藥途徑為靜脈注射，但因其在體內(nèi)的快速代謝，無法形成穩(wěn)定持久的血藥濃度，且臨床注射給

2、藥依從性較差。N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊通過消化道的緩釋作用，形成較為穩(wěn)定的血藥濃度，延長藥物作用時間，開辟N-乙酰半胱氨酸口服治療肝纖維化給藥途徑，增加患者依從性。
　　方法:①處方前研究。建立N-乙酰半胱氨酸高效液相色譜測定方法，制備活性炭載藥體，選擇明膠為囊材，（去除了聚丙烯酸樹脂Ⅱ/Ⅲ）采用乳化交聯(lián)法建立N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊制備方法。②優(yōu)化N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊制備工藝。利用正交試驗L9(34)，考察

3、藥載比、明膠濃度、攪拌速度和乳化劑濃度4因素對活性炭載藥囊芯的載藥量、包封率和粒徑分布的影響，得出最佳微囊制備工藝，評價微囊質(zhì)量。③考察N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊體外釋放情況及體內(nèi)血藥濃度變化，評價NCSM緩釋效果。④考察NCSM口服給藥對四氯化碳(CCl4)所致大鼠肝纖維化的治療作用。建立CCl4致大鼠肝纖維化模型，以NCSM高中低三個劑量:80mg·kg-1·D-1、40mg·kg-1·D-1、20mg·kg-1·D-1（按照乙

4、酰半胱氨酸計算），NAC、水飛薊賓作為陽性對照藥物，進行灌胃給藥。治療8周后處死大鼠，比較其不同給藥劑量與NAC和水飛薊賓對大鼠肝纖維化的治療作用，探討其對肝纖維化大鼠肝功能指標(biāo)、肝纖維化病理學(xué)及大鼠肝纖維化成纖細胞信號通路(TGF-β1/TβR-Ⅰ/Smad2/3)的影響，評價口服NCSM對肝纖維化模型大鼠的治療效果。
　　結(jié)果:①通過試制，確定成囊效果較好的明膠作為囊材進行N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊的制備工藝的研究。②正交

5、試驗L9(34)結(jié)果表明，成囊效果影響由大到小依次為藥載比（藥物與明膠的比例）＞攪拌速度＞明膠濃度＞乳化劑濃度。藥載比為1∶1，明膠濃度為15％，攪拌速度為1000 r·min-1和乳化劑(Span-80)濃度為2％的條件下，制備的NCSM粒徑均勻，載藥量，包封率高。驗證試驗結(jié)果表明，該工藝成囊質(zhì)量穩(wěn)定，確認(rèn)為N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊的最佳制備工藝。制備三批NCSM，平均粒徑為110.4μm±13.59μm，粒徑分布在80-140

6、μm的微囊占總數(shù)81.9％，平均包封率為78.1％，平均載藥量為15.9％。③體外釋放結(jié)果表明，NCSM在1h內(nèi)累計釋放為20.4％，24h為69.2％，符合一級動力學(xué)方程。小鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)結(jié)果表明，口服微囊的t1/2為NAC的3.32倍，AUC(0-24)為NAC1.18倍，具有明顯緩釋作用。④CCl4致大鼠肝纖維化模型制備成功，其大鼠肝組織病理切片HE染色和網(wǎng)狀纖維染色表明其肝纖維化程度為Ⅲ-Ⅳ期，免疫組化顯示胞內(nèi)TGF-β1/T

7、βR-Ⅰ和Smad2/3大量表達。NCSM各治療組大鼠肝組織病理切片表明肝纖維化好轉(zhuǎn)，免疫組化顯示胞內(nèi)TGF-β1/TβR-Ⅰ和Smad2/3表達減少，NCSM高劑量組（80mg·kg-1·D-1）表達具顯著性差異(p＜0.05)。
　　結(jié)論:采用乳化交聯(lián)法制備的N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊，粒徑均勻，載藥量和包封率穩(wěn)定。通過口服給藥途徑，與NAC比較，血藥濃度維持時間顯著增加，生物利用度顯著提高，達到緩釋作用。NCSM對大鼠肝