核桃葉殺蟲活性及生化機(jī)制的研究.pdf

1、核桃葉為植物胡桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)的樹葉，其資源豐富并存在一定的殺蟲活性。本文研究了核桃葉對三種農(nóng)業(yè)害蟲小菜蛾(Plutella xylostella L.)、棉蚜(Aphis gossypii G.)和菜青蟲(Pieris rapae L.)的殺蟲活性。以參與免疫防御的關(guān)鍵酶-酚氧化酶為靶點進(jìn)行研究，闡明核桃葉殺蟲的作用機(jī)制，為核桃葉靶向殺蟲提供理論依據(jù)。
　　(1)測定核桃葉50％、70

2、％、90％乙醇提取物對小菜蛾、棉蚜和菜青蟲的殺蟲活性。實驗表明:70％乙醇提取物的胃毒活性最強(qiáng)，棉蚜＞小菜蛾＞菜青蟲，其中棉蚜施藥30h和48h的致死中濃度分別為11.70mg/mL和5.07mg/mL;小菜蛾施藥3d和4d的致死中濃度分別為16.92mg/mL，8.31mg/mL;菜青蟲施藥3d和4d的致死中濃度分別為21.55mg/mL和13.86mg/mL。70％乙醇提取物對棉蚜的觸殺活性最好，25mg/mL接觸48h殺蟲率達(dá)到8

3、0.15％;90％乙醇提取物對小菜蛾和菜青蟲的觸殺活性最好，同樣條件下殺蟲率達(dá)71.23％和56.12％。70％乙醇提取物對小菜蛾的生長抑制效果最好，24h體重抑制率達(dá)34.12％;90％乙醇提取物對菜青蟲的生長抑制效果最好，24h體重抑制率為41.23％。90％乙醇提取物對三種試蟲拒食活性最強(qiáng)，48h的非選擇性和選擇性拒食活性均為棉蚜(81.96％，87.74％)＞菜青蟲(75.75％，79.35％)＞小菜蛾(61.20％，65.23

4、％)。
　　(2)以小菜蛾為昆蟲模型，探究核桃葉70％乙醇提取物殺蟲的作用機(jī)制。實驗表明:核桃葉提取物在給藥初期可以激活小菜蛾體外血淋巴的黑化，3d后黑化又被抑制。中間產(chǎn)物多巴的含量隨著給藥濃度的增加而升高，驗證了核桃葉對黑化反應(yīng)的激活作用。在蛋白質(zhì)水平上，核桃葉70％乙醇提取物對血淋巴中蛋白含量產(chǎn)生影響，以給藥48h為分界點，蛋白質(zhì)含量增后降低，變化浮動在10％左右。在血糖水平上，血淋巴中海藻糖的含量隨著提取物濃度的增加而降低，

5、隨著時間的變化在昆蟲體內(nèi)的含量先增加后減少。
　　(3)探究殺蟲過程中靶點-酚氧化酶的活性及蛋白和基因的表達(dá)量差異。酶學(xué)特性實驗表明:小菜蛾酚氧化酶在pH=6-6.8范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好，最適pH值為6.4，在20-40℃酶活相對穩(wěn)定，最適溫度為34℃。70％乙醇提取物在體外對小菜蛾酚氧化酶有激活作用，給藥濃度9mg/mL時，激活率達(dá)到35.09％。在體內(nèi)對4齡蟲的激活作用最強(qiáng)，測定對四齡蟲不同組織的激活作用，血淋巴＞表皮＞頭部。通過