大鼠再生肝細胞的分離鑒定和VEGF、HSP70的表達分析.pdf

1、目的：建立再生肝中各種細胞的分離鑒定方法；在組織和細胞水平上，研究大鼠肝再生過程中VEGF和HSP70的表達變化，并探討VEGF和HSP70在肝再生過程中的作用。方法：300只大鼠隨機分為正常對照組、假手術組和實驗組。切除實驗組大鼠2/3肝，分別于術后恢復2h、4h、8h、12h、16h、24h、36h、48h、72h、96h、120h、144h取肝組織或原位灌注分離細胞。用免疫組織化學和Western-blot技術檢測肝組織和分離的肝

2、實質細胞中VEGF和HSP70的表達變化，并做圖像分析。結果：(1)本實驗總結出一套簡單易行的肝臟中肝實質細胞、Kupffer細胞、肝血竇內皮細胞、肝星狀細胞的分離鑒定方法。(2)免疫組化結果顯示，VEGF主要由肝實質細胞分泌；在正常肝臟中很少表達，大部分肝切除后24h肝內VEGF表達開始增加，72h達到高峰，144h后恢復正常(P＜0.01)。肝組織Western-blot檢測結果表明，大鼠肝部分切除后24hVEGF的表達量開始增加，

3、48h-72hVEGF的表達量達到高峰，然后逐漸下降恢復到正常水平；所分離的肝實質細胞勻漿液中VEGF的表達量與肝組織勻漿液相比有一定的減少，尤其是PH36h到96h。(3)Western-blot結果與正常對照組相比，再生肝組織內PCNA的表達量分別在16h、36h、96h出現(xiàn)三個表達高峰，120h后開始下降，至144h后基本恢復到正常水平；分離恢復不同時期的肝實質細胞與肝組織表達規(guī)律基本相同。免疫組化結果顯示肝大部分切除后，在36h

4、到48h之間有很大一部分肝實質細胞表現(xiàn)為PCNA陽性，72h時肝血竇內皮細胞開始呈現(xiàn)PCNA陽性。(4)Western-blot檢測結果表明正常肝組織中HSP70低水平表達，PH后2h內HSP70的表達量有明顯的上升，12-24h表達水平較高，在96h表達量最多，以后又逐漸恢復到正常水平；而分離的不同恢復時期的肝實質細胞勻漿液中PH2h、48h、96hHSP70分別出現(xiàn)表達高峰，接著慢慢回落。結論：本實驗總結的細胞分離和鑒定方法具有簡單