擬南芥異三聚體G蛋白β和γ亞基在畢赤酵母中的表達及β亞基和RACK1相互作用研究.pdf

1、異三聚體GTP結(jié)合蛋白(heterotrimeric GTP-binding proteins，G蛋白)是活細胞內(nèi)一類具有重要生理調(diào)節(jié)功能的蛋白質(zhì)。自從上世紀70年代初在動物細胞中首先發(fā)現(xiàn)G蛋白的存在以來，有關(guān)G蛋白的研究發(fā)展迅速。對于植物G蛋白的研究于80年代后期才開始，處于相對滯后階段。擬南芥是一種重要的模式植物，對擬南芥異三聚體G蛋白功能和作用機制的研究對于闡明其他植物中G蛋白的功能和作用機制有著重要的參考意義。而一直以來研究較多

2、的是異三聚體G蛋白的主要功能亞基Gα，通常認為Gβγ的功能只是作為α亞基的負調(diào)節(jié)器并將其固定于細胞質(zhì)膜上。最近的研究認為，Gβγ二聚體是細胞信號系統(tǒng)中的主要紐帶之一，是調(diào)節(jié)代謝和生長信號傳遞的信號系統(tǒng)中的重要功能性亞基。 本實驗首先從擬南芥植物中分離克隆了G蛋白的β和γ亞基，通過轉(zhuǎn)基因手段成功地將克隆的基因轉(zhuǎn)化到巴斯德畢赤酵母中。利用巴斯德畢赤酵母表達體系成功表達了擬南芥異三聚體G蛋自的β和γ亞基。在本實驗培養(yǎng)條件下，β、γ1和

3、γ2亞基的表達量分別為483。3μg/mL、365μg/mL和359.7μg/mL。 另外，以擬南芥野生型Col、G蛋白β亞基功能缺失突變體agb1-2，RACK1蛋白功能缺失突變體rack1以及G蛋白β亞基和RACK1蛋白功能都缺失的雙突變體agb1-2|rack1種子為材料，研究AGB1和RACK1蛋白在擬南芥種子萌發(fā)過程中的作用，結(jié)果表明它們共同參與了擬南芥種子萌發(fā)過程中對春化作用、糖和激素的響應。 經(jīng)GST pu