WWP1、P53在瘢痕疙瘩和正常皮膚中的差異表達(dá)及意義.pdf

1、背景與目的：近年來(lái)人們對(duì)泛素化過(guò)程參與多種腫瘤的形成認(rèn)識(shí)越來(lái)越深入，E3泛素連接酶為泛素化過(guò)程中特異性識(shí)別底物的酶，其參與腫瘤的機(jī)制可能與其對(duì)細(xì)胞的增殖、衰老及信號(hào)通路的調(diào)控紊亂有關(guān)。2010年日本學(xué)者GWAS研究發(fā)現(xiàn) E3泛素連接酶 NEDD4-1基因可能與瘢痕疙瘩有關(guān)。E3泛素連接酶WWP1(The WW domain containing E3 ubiquitin protein ligase1），為NEDD4蛋白家族成員之一，與

2、該家族其他蛋白一樣也包含HECT及WW結(jié)構(gòu)域。WWP1已被證實(shí)在多種腫瘤中表達(dá)異常，其中乳腺癌和前列腺癌是報(bào)道最為詳實(shí)的兩種類(lèi)型。P53基因是一種公認(rèn)的抑癌基因，位于染色體17q13.1，與腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究眾多，參與細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)、腫瘤發(fā)生發(fā)展等過(guò)程。瘢痕疙瘩以侵襲性生長(zhǎng)為特征的成纖維細(xì)胞增殖凋亡異常及細(xì)胞外基質(zhì)過(guò)度沉積的疾病，可能與控制凋亡的基因功能缺失有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組織化學(xué)法（Immunohistoc

3、hemistry，ICH）和RT-PCR法分別檢測(cè)瘢痕疙瘩與正常皮膚組織WWP1、P53表達(dá)并比較是否有差異，進(jìn)而探討二者與瘢痕疙瘩形成是否相關(guān)。
　　材料與方法：選取瘢痕疙瘩標(biāo)本10例，年齡10~52歲（33.1±9.7），其中男6例，女4例，正常皮膚標(biāo)本10例年齡10~52歲（31.8±7.4），所取標(biāo)本分為2部分，一部分行RT-PCR，檢測(cè)組織中WWP1、P53mRNA表達(dá)；另一部分作免疫組化，檢測(cè)組織中WWP1、P53蛋白

4、表達(dá)。將-80 ℃液氮中保存的瘢痕疙瘩組織及正常皮膚組織取出放入加了 TRIzol RNA提取液的勻漿器，提取組織中總RNA，并用紫外分光光度計(jì)檢測(cè) RNA濃度和純度，將 RNA逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA,進(jìn)行 PCR擴(kuò)增。另一部分組織經(jīng)切片、脫蠟、加入抗體、孵育、顯色，脫水封片后顯微鏡下觀察并拍照。使用Image-Pro Plus圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，測(cè)定泛素轉(zhuǎn)移酶E3及P53蛋白累積光密度（Integrated Optical Densit

5、y, IOD）值。
　　結(jié)果：對(duì)兩組中P53蛋白染色發(fā)現(xiàn)，瘢痕疙瘩組織內(nèi)少見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞，瘢痕疙瘩組織中P53蛋白染色I(xiàn)OD值顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而瘢痕疙瘩組織泛素連接酶 E3 WWP1染色 IOD值顯著增加且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與正常皮膚相比，瘢痕疙瘩組織泛素連接酶E3 WWP1 mRNA表達(dá)水平顯著增加，而P53 mRNA的表達(dá)情況相較對(duì)照組顯著減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。