黃連對(duì)SD大鼠血清及其主要代謝產(chǎn)物的影響.pdf

1、目的:探討苦寒中藥黃連對(duì)SD大鼠血清色氨酸（Trp）及其兩種主要代謝產(chǎn)物犬尿氨酸(Kyn)和5-羥色胺(5-HT)的影響。
　　方法:
　　1.遵照《中國(guó)藥典》(2010版)測(cè)定實(shí)驗(yàn)用藥黃連的表小檗堿、巴馬汀、黃連堿、小檗堿含量，保證實(shí)驗(yàn)用藥品質(zhì)。
　　2.建立高效液相色譜儀-紫外檢測(cè)器(HPLC-UVD)同時(shí)測(cè)定大鼠血清中Kyn、Trp、5-HT的方法。
　　3.經(jīng)鑒定為合格的黃連常規(guī)制備水煎液。150只SD大

2、鼠隨機(jī)分為5個(gè)組別，黃連高、中、低劑量組分別給予高、中、低劑量黃連水煎劑灌胃干預(yù)，陰性對(duì)照組代以等體積純水，陽(yáng)性對(duì)照組以等體積氨芐西林水溶液(233mg/kg)灌胃。分別在第1、2、3周灌胃結(jié)束后隨機(jī)抽取以上各組大鼠10只采集血清樣本，HPLC-UVD法測(cè)定血清中Kyn、Trp、5-HT濃度。
　　結(jié)果:
　　1.經(jīng)鑒定實(shí)驗(yàn)用黃連為味連，檢測(cè)其表小檗堿、巴馬汀、黃連堿、小檗堿有效含量分別為7.31％、1.01％、1.80％、

3、1.91％。
　　2.HPLC-UVD檢測(cè)大鼠血清Kyn、5-HT、Trp濃度的方法學(xué)考察
　　(1)方法A:以20％高氯酸為血清蛋白質(zhì)沉淀劑，采用C18(250×4.6mm，5μm)色譜柱，流動(dòng)相為50mmol/L磷酸二氫鉀∶甲醇=80∶20(v/v)，于波長(zhǎng)225nm處可完成對(duì)SD大鼠血清中Kyn、5-HT、Trp濃度測(cè)定，其線性回歸方程分別為SKyn=93.902×CKyn-1.0873(0.397284μg～1.51

4、552μg,r=0.9995,n=3)、S5-HT=75.203×C5-HT-0.9348(0.386547μg～1.47456μg,r=0.9995，n=3)、STtp=105.91×CTrp-21.402（7.086696μg～27.0336μg，r=09995，n=3），平均提取回收率分別為101.15％(RSD=2.11％，n=9)、103.21％(RSD=3.77％,n=9)、90.69％(RSD=2.53％,n=9)。

5、>　　(2)方法B:以10％高氯酸為血清蛋白質(zhì)沉淀劑，采用C18（250×4.6mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相為50mmol/L磷酸二氫鉀∶甲醇=95∶5(v/v)，于波長(zhǎng)225nm處可完成對(duì)SD大鼠血清中Kyn、5-HT、Trp濃度測(cè)定，其線性回歸方程分別為SKyn=105.18×CKyn-2.0379(0.115625μg～7.4μg，r=0.9999，n=3)、S5-HT=66.934×C5-HT-0.5102(0.0875μg～5

6、.6μg，r=0.9999，n=3)、STrp=109.8×CTrp+37.73（1.6875μg～108μg，r=0.9998，n=3），平均提取回收率分別為104.11％(RSD=2.24％，n=9)、83.82％(RSD=3.75％，n=9)、87.79％(RSD=1.99％，n=9)。
　　3.黃連對(duì)大鼠血清Kyn、5-HT、Trp濃度影響
　　3.1、黃連對(duì)大鼠血清Kyn濃度影響
　　(1)氨芐西林組與空白組

7、比較:第1、3周無(wú)顯著差異(P＞0.05)，第2周呈顯著下降(P＜0.05）。
　　(2)與空白對(duì)照組比較:第1周低、中劑量組呈極顯著上升(P＜0.01），高劑量組呈顯著上升(P＜0.05）;第2周低、中、高劑量組呈顯著下降(P＜0.05）;第3周低劑量組呈顯著上升(P＜0.05)，中、高劑量組無(wú)顯著變化(P＞0.05)。
　　(3)與氨芐西林組比較:第1周低、中劑量組呈顯著上升(P＜0.05），高劑量組無(wú)顯著變化(P＞0.

8、05);第2周低、中、高劑量組無(wú)顯著差異（P＞0.05）;第3周低、中、高劑量組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　3.2、黃連對(duì)大鼠血清5-HT影響
　　(1)氨芐西林組與空白組比較:第1周無(wú)顯著差異(P＞0.05)，第2周呈顯著下降(P＜0.05），第3周呈極顯著下降(P＜0.01）。
　　(2)與空白對(duì)照組比較:第1周低、中、高劑量組無(wú)顯著差異(P＞0.05);第2周低劑量組無(wú)顯著差異(P＞0.05)，中劑量組呈顯

9、著下降(P＜0.05），高劑量組無(wú)顯著差異(P＞0.05);第3周低劑量組(P＞0.05)，中劑量組呈極顯著下降(P＜0.01），高劑量組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　(3)與氨芐西林組比較:第1周低、中、高劑量組無(wú)顯著差異(P＞0.05);第2周低、中、高劑量組無(wú)顯著差異(P＞0.05);第3周低劑量組呈顯著上升(P＜0.05)，中劑量組無(wú)顯著差異(P＞0.05)，高劑量組呈顯著上升(P＜0.05）。
　　3.3、黃連

10、對(duì)大鼠血清Trp影響
　　(1)氨芐西林組與空白組比較:第1、2、3周均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　(2)與空白對(duì)照組比較:各劑量組第1、2、3周均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。
　　(3)與氨芐西林組比較:各劑量組第1、2、3周均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.按《中國(guó)藥典》（2010版）實(shí)驗(yàn)用藥黃連鑒定為味連，其表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿含量均達(dá)到要求范圍，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。<

11、br>　　2.成功建立了大鼠血清中Kyn、5-HT、Trp濃度的測(cè)定方法A和方法B，兩種方法均可通過(guò)HPLC方法學(xué)考察，以方法B為優(yōu)。
　　3.一定劑量的黃連水煎劑對(duì)大鼠血清Trp及其代謝產(chǎn)物Kyn、5-HT濃度具有不同程度的影響。
　　(1)持續(xù)使用一定劑量黃連灌胃:第1周時(shí)可使大鼠血清Kyn濃度上升，第2周時(shí)可使大鼠血清Kyn濃度下降;第1、2、3周時(shí)可使大鼠血清Kyn濃度呈雙向改變。
　　(2)持續(xù)使用一定劑量黃