閾下劑量鈣拮抗劑抗大鼠心肌缺血再灌注損傷作用的研究.pdf

1、有效防治心肌缺血/再灌注(ischemia-reperfusion，I/R)損傷的問題目前仍未徹底解決，應(yīng)用鈣拮抗劑拮抗鈣超載是方法之一， L-型鈣通道(L-type voltage dependent calcium channel，L-VDCC)是經(jīng)典鈣拮抗劑的作用靶點。近年來已有零散報道鈣拮抗劑并非完全通過阻斷L-VDCC發(fā)揮作用，提出可能有新靶點和新機制存在。本課題組前期研究表明，臨床常用鈣拮抗劑維拉帕米(verapamil，V

2、er)、硝苯地平(nifedipine，Nif)與碘化N-正丁基氟哌啶醇(N-n-butyl haloperidol iodide， F2，我室合成的新鈣拮抗劑)在心肌細胞缺氧/復(fù)氧(hypoxia-reoxygenation，H/R)模型上，有非L-VDCC依賴地抗H/R損傷的作用。在此基礎(chǔ)上，本論文在大鼠整體觀察鈣拮抗劑閾下劑量拮抗心肌 I/R損傷的作用，探討和確認鈣拮抗劑在大鼠整體水平依然存在非L-VDCC依賴途徑抗心肌I/R損傷

3、的效應(yīng)。
　　方法：
　　第一部分：摸索靜脈或腹腔注射鈣拮抗劑引起大鼠血流動力學(xué)變化的最大耐受量
　　1．大鼠靜脈注射L-VDCC特異性激動劑BayK86441 mg/kg，觀察靜脈注射BayK86441 mg/kg對血壓或心室內(nèi)壓的影響，即觀察L-VDCC特異性激動劑BayK86441 mg/kg在血流動力學(xué)上的激動效應(yīng)。
　　2．大鼠靜脈注射Ver0.5 mg/kg、Nif3mg/kg、Dil6 mg/kg或

4、腹腔注射Ver10 mg/kg、Nif5 mg/kg，而后再靜脈注射BayK86441 mg/kg，評判應(yīng)用鈣拮抗劑阻斷L-VDCC所帶來的血流動力學(xué)的變化效應(yīng)。得出鈣拮抗劑使用的最大劑量(即上限劑量，超出該劑量出現(xiàn)毒性作用)。
　　第二部分：觀察腹腔注射鈣拮抗劑引起血流動力學(xué)變化的最小有效量
　　通過腹腔注射鈣拮抗劑Ver、Nif、Dil和F2，得出最小有效劑量，低于該劑量(閾下劑量)不引起血流動力學(xué)的變化。
　　第

5、三部分：觀察閾下劑量鈣拮抗劑對心肌I/R損傷的作用
　　1．建立大鼠I/R模型：通過結(jié)扎大鼠左前降支建立心肌I/R損傷模型。心電圖顯示ST段抬高為結(jié)扎成功的標志。缺血前15min腹腔注射閾下劑量鈣拮抗劑Ver0.75 mg/kg、Nif0.2 mg/kg、Dil0.5mg/kg和F21.5mg/kg。
　　2．通過全自動生化分析儀，檢測大鼠血清中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)、肌酸激酶(cr

6、eatine kinase，CK)及其同工酶(creatine kinase-MB，CK-MB)的含量。
　　3．黃嘌呤氧化酶法檢測心肌組織中超氧化物歧化酶(superoxyde dismutase，SOD)的活性，硫代巴比妥酸法檢測心肌組織中丙二醛(methane dicarboxylic aldehyde，MDA)的含量。
　　4．伊文思藍和TTC染色法檢測心肌梗死面積。通過軟件Image-pro plus6.0計算缺血

7、危險區(qū)/左室面積(area at risk/left ventricle, AAR/LV)和梗死區(qū)/缺血危險區(qū)(infarct size/area at risk, infarct size/AAR)。
　　結(jié)果：
　　第一部分：
　　靜脈注射Ver0.5 mg/kg、Nif3mg/kg、Dil6 mg/kg或腹腔注射Ver10 mg/kg、Nif5 mg/kg并不能消除激動劑BayK8644在血流動力學(xué)上的激動效應(yīng)。

8、
　　腹腔注射鈣拮抗劑Ver0.75 mg/kg、Nif0.2 mg/kg、Dil0.5 mg/kg和F21.5 mg/kg可不引起血流動力學(xué)變化。
　　第二部分：
　　1．腹腔注射鈣拮抗劑Ver0.75 mg/kg、Nif0.2 mg/kg與F21.5 mg/kg能顯著減少大鼠心肌I/R損傷后血清中LDH、CK、CK-MB的含量(p<0.05)。
　　2．腹腔注射鈣拮抗劑Ver0.75 mg/kg、Nif0.2

9、 mg/kg、Dil0.5 mg/kg與F21.5mg/kg能顯著增加大鼠心肌I/R損傷后心肌組織中SOD的活性，減少大鼠心肌I/R損傷后MDA的含量(p<0.05)。
　　3．腹腔注射鈣拮抗劑Ver0.75 mg/kg、Nif0.2 mg/kg與F21.5 mg/kg能顯著減少大鼠心肌I/R損傷后心肌梗死面積(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　閾下劑量的 Ver、Nif與 F2能有效改善心肌缺血再灌注損傷，揭示鈣拮抗