腹腔注射NR2B受體阻斷劑對單眼剝奪小鼠初級(jí)視皮層V1B區(qū)NMDA受體亞基表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　研究單眼形覺剝奪(Monocular deprivation, MD)小鼠腹腔注射N-甲基-D-天門冬氨酸（N-methy-D-aspartate, NMDA)亞基受體阻斷劑后視皮層NMDA受體亞基NR2A、NR2B表達(dá)變化。探討NR2A、NR2B發(fā)育性變化及NR2B亞基受體阻斷劑通過血腦屏障作用于視皮層的可行性，為探索弱視機(jī)制及相關(guān)藥物治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1．生后24天健康C57BL/6小

2、鼠20只將小鼠隨機(jī)分4組，每組5只。分別為：正常對照組（N組）；腹腔注射 Ifenprodil組（Ifenprodil組）；單眼剝奪組（MD組），單眼剝奪+腹腔注射 Ifenprodil組（MD+Ifenprodil組），每組5只。形覺剝奪為生后24天縫合右眼，制備形覺剝奪模型。腹腔注射Ifenprodil組，生后24天健康C57BL/6小鼠，分別于單眼剝奪第1、3、5天腹腔注Ifenprodil，給藥劑量為10mg/kg；單眼剝奪+腹

3、腔注射ifenprodil組，單眼剝奪后同時(shí)對小鼠腹腔注射 Ifenprodil，給藥計(jì)量、頻率同腹腔注射組。所有實(shí)驗(yàn)組小鼠均在自然光線環(huán)境下飼養(yǎng)。麻醉致死斷頭取腦。
　　2．冰凍切片采用HE染色及免疫熒光組織化學(xué)方法檢測小鼠雙側(cè)視皮層NMDA受體亞基NR2A、NR2B的表達(dá)。
　　3．采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR（Quantitative Real-time PCR）檢測各組小鼠視皮層NMDA受體亞基NR2AmRNA和NR2Bm

4、RNA的相對表達(dá)量。應(yīng)用2-△△CT法計(jì)算NR2A、NR2B基因的相對表達(dá)量。
　　統(tǒng)計(jì)方法：所有統(tǒng)計(jì)資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差；同組內(nèi)小鼠左右側(cè)視皮層數(shù)據(jù)的差異采用配對t檢驗(yàn)；各組間同側(cè)視皮層數(shù)據(jù)的差異采用雙因素方差分析，當(dāng)P＜0.05為差異具有顯著性。
　　結(jié)果：
　　1.HE染色顯示，腹腔注射 Ifenprodil組、單眼剝奪組、單眼剝奪+腹腔注射 Ifenprodil組及正常對照組小鼠兩側(cè)視皮層神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)的構(gòu)筑清

5、晰，層次分明，視神經(jīng)各層神經(jīng)元排列整齊，與正常組比較未見明顯異常。
　　2.免疫熒光結(jié)果顯示受體陽性細(xì)胞主要位于細(xì)胞膜及細(xì)胞胞漿。各組內(nèi)視皮層 NR2A表達(dá)結(jié)果如下：四組小鼠視皮層 NR2A、NR2B相對表達(dá)：N組及Ifenprodil組左右側(cè)視皮層 NR2A、NR2B相對表達(dá)差異無顯著性（P=0.834， P=0.727；P=0.837，P=0.624）。MD組剝奪眼對應(yīng)視皮層較之非剝奪眼對應(yīng)視皮層 NR2A表達(dá)降低（t=-2.

6、485，P＜0.05）、NR2B的表達(dá)增多（t=4.404，P＜0.05）。MD+Ifenprodil組剝奪眼對應(yīng)視皮層較之非剝奪眼對應(yīng)視皮層 NR2A表達(dá)減少(t=-3.596,P＜0.05），NR2B表達(dá)差異無顯著性。四組小鼠左側(cè)視皮層NR2A、NR2B相對表達(dá)：與N組相比，MD組與MD+Ifenprodil組較之N組剝奪眼對應(yīng)視皮層 NR2A表達(dá)減少（t=-0.315，P＜0.05；t=-3.397，P＜0.05）；較之 Ifen

7、prodil組，MD+Ifenprodil組NR2A表達(dá)減少（t=4.716，P＜0.05）。MD組 NR2B表達(dá)量較之 N組表達(dá)增多（t=-6.812， P＜0.05）， Ifenprodil組與 MD+Ifenprodil組較 N組左側(cè)視皮層 NR2B表達(dá)相對減少（t=5.633， P＜0.05；t=5.409， P＜0.05）；四組小鼠右側(cè)視皮層 NR2A、NR2B相對表達(dá)：與 N組相比，Ifenprodil組、MD組與MD+If

8、enprodil組非剝奪眼對應(yīng)視皮較 N組 NR2A表達(dá)增多（t=-4.168，P＜0.05；t=-2.619，P＜0.05；t=-3.397，P＜0.05）。Ifenprodil組與MD+Ifenprodil組較N組右側(cè)視皮層NR2B相對表達(dá)減少（t=5.316，P＜0.05；t=6.366，P＜0.05）。
　　3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，以內(nèi)參照GAPDH基因及正常對照組基因表達(dá)為標(biāo)準(zhǔn)。以正常對照組變化倍數(shù)為1，各組內(nèi)視

9、皮層 NR2AmRNA表達(dá)結(jié)果如下：四組小鼠左右側(cè)視皮層NR2A mRNA、NR2B mRNA相對表達(dá)分析：N組及 Ifenprodil組左右側(cè)視皮層 NR2A mRNA、NR2B mRNA相對表達(dá)無顯著性差異（P=0.975，P=0.884；P=0.859，P=0.906）。MD組剝奪眼對應(yīng)視皮層較之非剝奪眼對應(yīng)視皮層NR2A mRNA的表達(dá)減少（t=-9.201，P＜0.05）、NR2B mRNA的表達(dá)增多（t=9.876，P＜0.

10、05）。MD+Ifenprodil組剝奪眼對應(yīng)視皮層 NR2A mRNA表達(dá)減少（t=-7.436P＜0.05）。四組小鼠左側(cè)視皮層NR2A mRNA、NR2B mRNA相對表達(dá)分析：與N組相比，Ifenprodil組剝奪眼側(cè)視皮層NR2A mRNA表達(dá)增多(t=-4.352，P＜0.05)，MD組與MD+Ifenprodil組較 N組 NR2A mRNA表達(dá)量減少（t=8.861， P＜0.05）；MD組 NR2B mRNA表達(dá)較之

11、N組表達(dá)升高，Ifenprodil組與 MD+Ifenprodil組較 N組左側(cè)視皮層NR2B mRNA相對表達(dá)降低（t=4.379，P＜0.05；t=5.445，P＜0.05）四組小鼠右側(cè)視皮層 NR2A mRNA、NR2B mRNA相對表達(dá)量分析：與 N組相比，Ifenprodil組、MD組與MD+Ifenprodil組非剝奪眼側(cè)較N組NR2A mRNA表達(dá)增多（t=-2.746，P＜0.05；t=-3.932，P＜0.05；t=-

12、3.511，P＜0.05）。MD組 NR2B mRNA表達(dá)減少（t=-3.932， P＜0.05）， Ifenprodil組與MD+Ifenprodil組較 N組右側(cè)視皮層 NR2B mRNA相對表達(dá)降低（t=4.379，P＜0.05；t=5.445，P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.視皮層正常發(fā)育時(shí)，NMDA受體亞基的表達(dá)呈發(fā)育依賴變化，即：NR2A表達(dá)增加，NR2B表達(dá)減少。單眼形覺剝奪影響NMDA受體亞基表達(dá)，剝奪