遼寧堿蓬SINAC6、SINAC7基因克隆及功能分析.pdf

1、分類號：密級學校代碼：學號：10165201211001067遣掌研筢大學碩士學位論文⑨遼寧堿蓬SINAC6、SINAC7基因克隆及功能分析作者姓名：學科、專業(yè)：研究方向：施鶴植物學植物分子生物學與基因工程導!J幣姓名：李秋莉教授2015年03月遼寧師范大學碩士學位論文摘要NAC轉錄因子在植物的生長發(fā)育，抵抗干旱、高鹽、低溫、損傷、病毒，以及其它生理過程中起著重要的調控作用。遼寧堿蓬是一種鹽生植物，有大量的耐鹽基因待研究。本論文以實驗室

2、前期獲得的遼寧堿蓬的兩個NAC轉錄因子(命名為SINAC6、SINAC7)的EST序列為對象，進行了基因克隆和功能研究。RACE技術獲得了SlNAC6、SINAC7eDNA全長序列，SINAC6eDNA1301bp，GenBank登錄號為KR002106，編碼353個氨基酸，GenBank登錄號為l氓002106；SINAC7eDNA1863bp，編碼573個氨基酸，GenBank登錄號為KR002107。多重序列比對及進化樹分析表明，

3、SINAC6屬于ONAC003亞家族，SINAC7屬于ANAC01l亞家族。實時定量PCR技術分析兩個轉錄因子基因的表達特性。SINAC6與SINAC7在遼寧堿蓬的根、莖、葉中均有表達，葉中表達量較高。SINAC6、S1NAC7響應鹽、低溫、干旱和ABA脅迫。酵母單雜交分析結果顯示，SINAC6、SINAC7及SINAC6的C端、SINAC7的C端均具有轉錄激活活性，而保守的N端均不具有轉錄激活活性。推測SINAC6、SINAC7是轉錄

4、因子，轉錄激活域在C端?；驑屴D化法分別將SINAC6GFP、SINAC7GFP融合蛋白轉化至洋蔥表皮細胞，結果顯示，SlNAC6GFP、SINAC7GFP融合蛋白分布于細胞核、細胞質中，推測分布于細胞核中的SINAC6、SINAC7是轉錄因子，在核內(nèi)行使轉錄因子的功能，分布于細胞質中的SINAC6、SINAC7可能具有其他功能。蘸花法分別將SINAC6與SINAC7轉化擬南芥，獲得純合的轉基因擬南芥。對轉基因擬南芥進行非生物脅迫處理，