耐阿奇霉素與頭孢曲松低敏淋病奈瑟菌的耐藥機制及分子流行病學研究.pdf

1、本文主要從以下三部分展開論述：
　　第一部分 南京地區(qū)淋球菌抗生素耐藥情況分析
　　目的:監(jiān)測南京地區(qū)淋球菌對抗生素的敏感性，分析2013至2014年度淋球菌耐藥情況。
　　方法:連續(xù)招募2013～2014年間就診于南京性病門診具有急性尿道炎癥狀的男性患者，并進行淋球菌分離培養(yǎng)。對培養(yǎng)陽性的384株淋球菌以瓊脂稀釋法測定青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、大觀霉素、頭孢克肟、頭孢曲松及阿奇霉素對淋球菌的最小抑菌濃度(MIC)。采

2、用酸度紙片法測定產(chǎn)青霉素酶淋球菌(PPNG)，以多重聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法對PPNG和四環(huán)素高度耐藥淋球菌(TRNG)所攜帶的耐藥質(zhì)粒進行分型，并對PPNG菌株進行blaTEM基因檢測。
　　結(jié)果:本研究中淋球菌對抗生素耐藥率依次為環(huán)丙沙星100％(384/384)、四環(huán)素85.9％(330/384)、青霉素72.1％(277/384)、阿奇霉素32.3％(124/384)。阿奇霉素高度耐藥菌株比例為10.4％(40/384)，

3、頭孢曲松低敏菌株比例為9.9％(38/384)。未發(fā)現(xiàn)大觀霉素、頭孢克肟和頭孢曲松耐藥株。在全部菌株中，PPNG占46.9％(180/384)，TRNG比例為34.6％(133/384)。PPNG主要攜帶亞洲型質(zhì)粒(73.3％，132/180)，非洲型質(zhì)粒比例(26.7％，48/180)較2011～2012年度(10.0％，12/120)呈顯著性上升（x2=12.500，P＜0.001）。TRNG的主要質(zhì)粒型別為荷蘭型(91.7％，12

4、2/133)。41.1％(74/180)的PPNG中含有blaTEM-135基因。
　　結(jié)論:頭孢曲松和大觀霉素仍可作為本地區(qū)淋球菌治療的一線用藥，但頭孢曲松低敏株的增多、大觀霉素MIC呈上升趨勢均提示應(yīng)繼續(xù)加強淋球菌耐藥性監(jiān)測。阿奇霉素高度耐藥淋球菌在南京地區(qū)出現(xiàn)，且占有較高比例，提示本地區(qū)不宜推薦頭孢曲松和阿奇霉素聯(lián)合治療淋球菌感染。南京地區(qū)淋球菌質(zhì)粒介導的耐藥比例和TRNG質(zhì)粒型別分布與上一年度相比無顯著變化，但攜帶非洲型質(zhì)

5、粒PPNG的比例上升提示可能存在菌株間的跨洲際交流。本地區(qū)PPNG中blaTEM-135基因以高比例存在。
　　第二部分 耐阿奇霉素淋球菌的耐藥機制和分子流行病學研究
　　目的:了解南京地區(qū)阿奇霉素耐藥淋球菌菌株的耐藥相關(guān)基因突變情況、基因型別及菌株間的進化關(guān)系。
　　方法:對124株阿奇霉素耐藥菌株進行耐藥相關(guān)基因（23S rRNA、mtrR、rplD、rplV）檢測，并比較耐藥基因突變在中度耐藥組(MIC1～64

6、mg/L)和高度耐藥組(MIC＞256mg/L)間的差異。以淋球菌多抗原序列分型(NG-MAST)方法確立菌株的序列型(ST)，并構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。
　　結(jié)果:所有阿奇霉素高度耐藥菌株均出現(xiàn)23S rRNA基因4個等位基因的A2143G突變，中度耐藥組中59.5％(50/84)出現(xiàn)該基因4個等位基因的C2599T突變，兩組間比較均有顯著性差異。mtrR編碼區(qū)G45D替換突變在高度耐藥組比例分別為70.0％(28/40)，與中度耐藥組

7、(13.1％，11/84)相比有顯著性差異(x2=40.698，P＜0.001);H105Y突變在高度耐藥組和中度耐藥組的比例分別為22.5％(9/40)和71.4％(60/84)，兩組間有顯著性差異(x2=26.283，P＜0.001)。所有菌株均未檢出rplD和rplV突變。124株阿奇霉素耐藥菌株共鑒定出71個不同的STs，其中28個為新發(fā)現(xiàn)的STs;高度耐藥組中45.0％(18/40)的序列型為ST1866。經(jīng)系統(tǒng)進化樹分析未發(fā)

8、現(xiàn)阿奇霉素耐藥與頭孢曲松低敏菌株同源進化現(xiàn)象。
　　結(jié)論:23S rRNA基因V區(qū)的特定位點等位基因突變在阿奇霉素耐藥中發(fā)揮重要作用，A2143G和C2599T突變分別與阿奇霉素高度和中度耐藥相關(guān)。mtrR編碼區(qū)G45D替換突變可能參與阿奇霉素高度耐藥，而H105Y替換突變可能與中度耐藥有關(guān)。南京地區(qū)的阿奇霉素耐藥菌株具有遺傳背景的多樣性。ST1866是本地區(qū)與阿奇霉素高度耐藥相關(guān)的優(yōu)勢基因型。
　　第三部分 頭孢曲松低敏淋

9、球菌的耐藥機制和分子流行病學研究
　　目的:了解南京地區(qū)頭孢曲松低敏淋球菌菌株的耐藥相關(guān)基因突變情況、基因型別及菌株間的進化關(guān)系。
　　方法:對38株頭孢曲松低敏株(MIC0.125mg/L)進行5個耐藥相關(guān)基因(penA、mtrR、porB、ponA和pilQ)檢測，并將20株頭孢曲松敏感株(MIC≤0.002～0.015mg/L)設(shè)為對照組。以NG-MAST方法確立菌株的ST，并構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。
　　結(jié)果:本研究共

10、檢測出11種非鑲嵌狀PBP2類型，并發(fā)現(xiàn)一種新的類型ⅩLⅡ;未檢出鑲嵌狀模式。頭孢曲松低敏組PBP2主要類型為ⅩⅧ(n=17)和ⅩⅢ(n=16)。頭孢曲松低敏組100％發(fā)生A501位點(A501V/T)突變，而頭孢曲松敏感組20.0％(4/20)出現(xiàn)該位點突變，兩組間比較有顯著性差異(x2=41.981，P＜0.001)。mtrR啟動子區(qū)A缺失與編碼區(qū)H105Y聯(lián)合突變率在頭孢曲松低敏組和敏感組分別為63.2％(24/38)和30.0％

11、(6/20)，兩組間比較有顯著性差異（x2=5.770，P=0.016）。mtrR編碼區(qū)其他替換(A39T、G45D)、porB1b及ponA(L421P)突變率在兩組間未見顯著性差異。所有菌株均未檢出pilQ突變。經(jīng)NG-MAST分型和系統(tǒng)進化樹分析，頭孢曲松低敏菌株間未出現(xiàn)克隆傳播現(xiàn)象。
　　結(jié)論:特定的非鑲嵌狀penA突變模式（特別是PBP2氨基酸A501位點突變）可能在介導本地區(qū)淋球菌對頭孢曲松低敏中發(fā)揮重要作用。mtrR