二十五味珊瑚丸納米顆粒生物安全性評(píng)價(jià).pdf

1、二十五味珊瑚丸(Ershiwuwei Shanhu'Pill，ESP)被收錄于《中國(guó)藥典》2010版中，被藏族人民用于治療“白脈病”，現(xiàn)代主要用于治療癲癇、中風(fēng)、偏頭痛等疾病。由于該藥中含有朱砂、烏頭等劇毒物質(zhì)，其生物安全性備受關(guān)注，以往的文獻(xiàn)也著眼于此。最近，本課題組通過(guò)使用現(xiàn)代技術(shù)，從ESP中提取出納米顆粒，并希望能將其制作為注射劑應(yīng)用于臨床上。然而ESP納米顆粒的生物安全性并未受過(guò)檢驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)將ESP納米顆粒分別干預(yù)細(xì)胞與SD大鼠

2、，通過(guò)采用熒光示蹤觀察納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)的分布、HE染色觀察腦、肝組織病理變化、曠場(chǎng)試驗(yàn)檢測(cè)大鼠最大運(yùn)動(dòng)距離、蛋白免疫印跡檢測(cè)GFAP、tau蛋白表達(dá)水平、PCR檢測(cè)mir-7、SNCA基因表達(dá)等方法分析并評(píng)價(jià)ESP納米顆粒的生物安全性，并為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)ESP的新劑型和提高臨床療效提供理論依據(jù)。
　　目的：
　　對(duì)ESP的生物安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　方法：
　　對(duì)ESP納米顆粒進(jìn)行粒徑與Zeta電位分析，將ESP納米顆

3、粒與SH-SY5Y細(xì)胞共培養(yǎng)8h，熒光顯微鏡與透射電鏡下觀察其在細(xì)胞吸收分布情況。大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組和用藥組，分別通過(guò)尾靜脈注射生理鹽水或ESP納米顆粒，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(Open field test，OFT)評(píng)估大鼠興奮度變化，免疫熒光觀察納米顆粒在腦、肝臟中的分布，HE染色觀察腦、肝臟形態(tài)的變化，蛋白質(zhì)印跡法(Western blot，WB)檢測(cè)神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GF

4、AP)、tau(microtubule-associated protein tau，tau)蛋白表達(dá)水平，TBA法檢測(cè)血漿中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)，丙二醛(Maleic dialdehyde，MDA)的表達(dá)水平，q-pcr檢測(cè)mir-7的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　粒徑分析表明ESP中存在有納米顆粒，熒光顯微鏡與透射電鏡結(jié)果提示ESP納米顆?？赏高^(guò)細(xì)胞膜，出現(xiàn)在各種細(xì)胞器中，可導(dǎo)

5、致細(xì)胞核破碎。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，與生理鹽水組相比，用藥組大鼠動(dòng)物總運(yùn)動(dòng)距離顯著增加(P＜0.05)，熒光顯微鏡下觀察顯示ESP納米顆粒出現(xiàn)在海馬與肝臟中，HE染色結(jié)果顯示用藥組海馬區(qū)域出現(xiàn)炎癥反應(yīng)、肝細(xì)胞大量液化壞死，WB結(jié)果顯示經(jīng)ESP納米顆粒處理后，大鼠大腦中GFAP、tau蛋白表達(dá)增高，TBA法提示實(shí)驗(yàn)組血漿T-SOD含量下降，且MDA含量上升。而q-pcr結(jié)果顯示ESP納米顆粒處理后SH-SY5Y細(xì)胞mir-7的表達(dá)下降。