牛蒡子質(zhì)量評價(jià)及炮制過程化學(xué)成分變化規(guī)律研究.pdf

1、牛蒡子是一味臨床常用的中藥，主要產(chǎn)于吉林、遼寧、黑龍江、浙江等地區(qū)。目前，牛蒡子藥材及飲片的質(zhì)量控制主要以木脂素類成分牛蒡苷和牛蒡苷元的含量為指標(biāo)，忽視了牛蒡子中具有重要藥理活性的酚酸類成分，如綠原酸、異綠原酸A等。因此，研究建立牛蒡子多指標(biāo)質(zhì)量評價(jià)方法，采用多指標(biāo)成分進(jìn)行質(zhì)量控制具有重要的意義。牛蒡子常炒制后使用，目前不同地方炮制規(guī)范中牛蒡子的炮制工藝尚不夠規(guī)范統(tǒng)一，存在微炒、炒黃和炒焦等幾種炮制工藝，炒制程度也有顯著差異。牛蒡子炮制

2、前后化學(xué)成分發(fā)生了復(fù)雜的變化，這些成分是如何變化的？其變化過程和變化規(guī)律是什么？還有待進(jìn)一步研究闡明。
　　基于上述問題，本文對牛蒡子質(zhì)量評價(jià)方法和炮制過程化學(xué)成分變化規(guī)律進(jìn)行了系統(tǒng)研究，建立了牛蒡子質(zhì)量評價(jià)方法，并闡明了牛蒡子炮制過程主要成分的變化規(guī)律。
　　本文在前期化學(xué)成分研究的基礎(chǔ)上，首先以牛蒡子中綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷和牛蒡苷元等4個(gè)主要成分為質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法和響應(yīng)面法兩種方法優(yōu)選牛蒡子超聲提取工藝

3、。結(jié)果顯示，不同工藝優(yōu)選方法確定的工藝條件相近。為了進(jìn)一步比較超聲提取工藝和回流提取工藝的提取效果，本文又采用正交實(shí)驗(yàn)法，對牛蒡子的回流提取工藝進(jìn)行研究，建立了牛蒡子最佳回流提取工藝。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在回流提取和超聲提取過程中，粉碎粒度都是影響牛蒡子成分溶出的最重要因素，這說明牛蒡子在臨床使用過程中需破碎后使用具有一定的科學(xué)內(nèi)涵，符合古代炮制文獻(xiàn)和現(xiàn)代中藥飲片炮制規(guī)范對牛蒡子炮制后“用時(shí)搗碎”的要求。
　　在牛蒡子提取工藝研究的基礎(chǔ)上，

4、本文對不同產(chǎn)地牛蒡子進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)研究，建立不同產(chǎn)地牛蒡子的定性定量評價(jià)方法。在定量分析研究中，采用HPLC法測定不同產(chǎn)地牛蒡子中牛蒡苷等4個(gè)主要成分的含量，通過對20批次樣品的測定結(jié)果進(jìn)行分析，暫定牛蒡子中4個(gè)主要成分的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)為:綠原酸:1.50mg/g、異綠原酸A:1.00mg/g、牛蒡苷:50.0mg/g、牛蒡苷元:5.00mg/g。采用指紋圖譜技術(shù)聯(lián)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法，對不同產(chǎn)地牛蒡子進(jìn)行定性分析。研究結(jié)果顯示，指紋圖譜技術(shù)結(jié)

5、合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法可以有效的評價(jià)牛蒡子內(nèi)在質(zhì)量，并且質(zhì)量相似的聚在一起，為牛蒡子飲片的整體質(zhì)量評價(jià)提供全面、客觀和準(zhǔn)確的依據(jù)。
　　本文采用定性分析和定量分析相結(jié)合的方法，對牛蒡子炮制前后進(jìn)行分析。在定量分析中，通過15批牛蒡子樣品分析顯示，牛蒡子炮制后綠原酸、異綠原酸A和牛蒡苷的含量降低，牛蒡苷元的含量升高。采用指紋圖譜技術(shù)結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法對炮制前后樣品進(jìn)行定性分析后發(fā)現(xiàn)，牛蒡子炮制前后整體質(zhì)量發(fā)生顯著差異，在聚類分析和主成分分

6、析中，炮制前后牛蒡子均可單獨(dú)聚為一類，含量不合格樣品可以被準(zhǔn)確識別。由此可見，該方法可以準(zhǔn)確的對牛蒡子生品及炮制品進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)。在此基礎(chǔ)上，對牛蒡子炮制前后水煎液樣品中的主要成分進(jìn)行含量分析，結(jié)果顯示，炮制后的水煎液中牛蒡苷的含量呈下降趨勢。綠原酸和異綠原酸A的含量也明顯降低，只有牛蒡苷元含量升高，且4個(gè)成分的總量下降。因此，傳統(tǒng)炮制理論認(rèn)為牛蒡子炮制機(jī)理為“促進(jìn)有效成分溶出”的解釋值得商榷。采用UPLC-QTOF-MS技術(shù)對牛蒡子炮制

7、前后的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)牛蒡子炮制前后化學(xué)成分發(fā)生復(fù)雜的變化，生品中檢測到18個(gè)成分，炮制品中檢測到21個(gè)成分，炮制過程中可能發(fā)生了成分分解、轉(zhuǎn)化反應(yīng)。
　　在炮制前后變化研究的基礎(chǔ)上，本文對牛蒡子炮制過程中7個(gè)成分的含量變化進(jìn)行過程分析。結(jié)果顯示，牛蒡子炮制過程中牛蒡苷的含量先略升高，后因受熱分解而含量降低，牛蒡苷元的含量升高，推測在炮制過程中牛蒡苷受熱分解生成牛蒡苷元。綠原酸和異綠原酸A含量均明顯下降，而咖啡酸的含

8、量顯著升高，推測在炮制過程中，這兩個(gè)成分受熱分解產(chǎn)生咖啡酸。因此，牛蒡子炮制過程中應(yīng)嚴(yán)格控制炮制工藝，考慮到牛蒡苷元和咖啡酸具有顯著的藥理活性，在系統(tǒng)的比較研究的基礎(chǔ)上，建議牛蒡子在炮制過程中應(yīng)控制藥材溫度在160℃左右，炒制時(shí)間在5-10min。為了進(jìn)一步驗(yàn)證牛蒡子炮制過程中主要成分的變化規(guī)律，本文對牛蒡子中綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷和牛蒡苷元等4個(gè)主要成分單獨(dú)受熱和混合受熱過程進(jìn)行研究。結(jié)果顯示，上述4個(gè)成分混合加熱，可以提高分解效

9、率。說明牛蒡子炮制過程中化學(xué)成分變化是多成分綜合作用的結(jié)果，且酚酸類成分的存在可以加速牛蒡苷的分解。
　　本文對牛蒡子炮制過程脂肪油類成分進(jìn)行研究。采用GC-MS法研究牛蒡子炮制過程中脂肪油類成分的變化，結(jié)果顯示，牛蒡子炮制過程中，脂肪油成分發(fā)生了顯著的變化。在180℃炮制過程中，共檢測到38個(gè)成分，其中生品檢測到21個(gè)成分，不同時(shí)間點(diǎn)炮制品中檢測到17個(gè)成分。炮制過程中，有21個(gè)成分消失，新生成了17個(gè)成分。由于牛蒡子具有潤腸通