基于中藥方劑配伍機理的中藥有效成分在食管癌前病變進程中的免疫調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:本課題擬研究“連翹、天花粉蛋白、黨參、香加皮”中有效成分組成的“連花參加”方逆轉(zhuǎn)化學(xué)致癌劑4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitro-quinoline-1-oxide，4NQO)誘導(dǎo)小鼠(C57BL/6)食管癌前病變的效果及潛在的免疫調(diào)節(jié)機制。
　　方法:
　　1選取300只C57BL小鼠動物模型，按隨機原則分為6組，分別為空白對照組(A1組)（不做任何處理）30只;甲基纖維素對照組(A2組)30只，給予甲基纖維素灌胃

2、，不給藥;誘癌劑組（B組），治療組（C組），預(yù)防組（D組），全反式維甲酸陽性對照組（E組），用滅菌水配制成100μg/ml濃度，采取正常飲水法給B、C、D、E四組小鼠。受試藥“連花參加”方的配制方法為連翹脂素(2mg)∶天花粉蛋白(1.4mg)∶香加皮三萜類化合物(1.4mg)∶黨參蛋白(0.7mg)，按此比例混合溶于1.5％的甲基纖維素，定容20ml。D組在實驗開始就給與中藥方劑“連花參加”方灌胃。C組第15周開始給予中藥方劑“連花參

3、加”方灌胃，E組也在15周進行“全反式維甲酸（ATRA）”灌胃。C、D、E組小鼠每周均灌胃三次，每次0.1ml。
　　2該實驗從第12周時分別把A1、A2、B、D組小鼠處死5只，觀察結(jié)果顯示小鼠食管未出現(xiàn)不典型增生。在15周時，與12周采取同樣的處理，HE染色結(jié)果顯示小鼠食管發(fā)現(xiàn)早期不典型增生。從15周開始，將B組、C組、D組、E組100μg/ml4NQO水溶液統(tǒng)一更換為滅菌水。第18、21周，A1、A2組各處死5只，B、C、D、

4、E組各處死15只，第24周時，處死剩余小鼠，均為斷頸處死。
　　3建立小鼠癌前病變的模型，HE檢測B組不同時期組織的病理學(xué)變化，鑒定腫瘤進展的階段。
　　4提取小鼠脾細胞，觀察用藥前后對脾細胞中淋巴細胞的影響。用流式細胞法檢測小鼠脾細胞中CD4+，CD8+，B7-H4(B7homologue4)，CD4+CD25+foxp3+等T細胞及其表面分子在不同時間點的組間變化情況。
　　結(jié)果:
　　1成功建立了小鼠食管癌

5、癌前病變的模型，HE染色發(fā)現(xiàn)第15周時4NQO誘癌組的小鼠開始有輕度不典型增生。并且隨著時間的延長，病變程度逐漸加深。
　　2通過HE染色結(jié)果顯示，小鼠食管組織病變程度在24周時，有顯著性差異，P＜0.05，C、D、E組的致癌率比B組顯著降低，P＜0.05，說明“連花參加”方可減緩食管癌病變的進程。
　　3實驗結(jié)果顯示在18周和21周時各組間CD4+CD25+foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞占脾淋巴細胞的百分率表達水平無統(tǒng)計學(xué)差異;

6、在24周時各組間有統(tǒng)計學(xué)差異，P＜0.05。
　　4 B7-H4在CD4+上的表達率在21周和24周時出現(xiàn)顯著性差異，P＜0.05。B7-H4在CD8+T細胞和CD4+CD25+foxp3+T細胞上的表達率在18周、21周和24周時均無顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　1成功建立了小鼠食管癌前病變動物模型。
　　2“連花參加”方通過抑制Treg細胞在脾淋巴細胞上的表達和B7-H4在CD4+T細胞的表達，促進了機體抗腫