XBFD誘導(dǎo)H22荷瘤小鼠顆粒酶-穿孔素凋亡途徑的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究小半夏加茯苓湯(Xiao Ban Xia Plus Fuling Decoction，XBFD)對H22荷瘤小鼠的抑瘤作用，并通過血清學(xué)和腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)分子表達(dá)水平的檢測，探討XBFD抗腫瘤的分子機(jī)制及其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的途徑，為XBFD在臨床抗腫瘤應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:建立體內(nèi)H22荷瘤小鼠模型，隨機(jī)分為荷瘤模型組，XBFD高劑量組，XBFD中劑量組，XBFD低劑量組，順鉑組，每組30只。接種次日開始給藥，

2、荷瘤模型組給予生理鹽水10 g·kg-1，日一次;XBFD高、中、低劑量組，分別給予XBFD4g、2g、1g生藥·mL-1水煎劑40、20、10 g·kg-1，日一次;順鉑組5 mg·kg-1腹腔注射0.9％氯化鈉溶液稀釋順鉑，分別于第1、4、7、10日各給藥1次，觀察小鼠生存狀態(tài)及死亡情況等，實(shí)驗(yàn)第11日稱重眼球取血后處死小鼠，取瘤體。采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測血清，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、蘇木精-伊紅(HE

3、)染色、原位末端凋亡法(TUNEL)和免疫組化(IHC)檢測腫瘤組織。
　　結(jié)果:(1)XBFD各劑量組給藥后體重均增高，瘤重隨劑量增大而降低，提示XBFD有明顯的抑瘤效果。
　　(2) ELISA結(jié)果顯示:與荷瘤模型組比較，XBFD中劑量組、順鉑組血清中的TNF-α的含量有明顯的增加，XBFD高劑量組血清中的IL-2的含量有明顯的增加。
　　(3) RT-PCR結(jié)果表明:與荷瘤模型組比較，XBFD各劑量組顆粒酶A表達(dá)

4、升高，但無顯著性差異;XBFD高、中劑量組顆粒酶B表達(dá)升高(p＜0.05); XBFD高、中劑量組穿孔素表達(dá)升高，促進(jìn)顆粒酶/穿孔素途徑非自愿性細(xì)胞凋亡。
　　(4) HE染色結(jié)果顯示:建立的模型是成功的。
　　(5) TUNEL結(jié)果表明:XBFD能夠增加H22細(xì)胞凋亡數(shù)量，且隨藥物劑量的增大凋亡率升高。
　　(6) IHC結(jié)果表明:XBFD各劑量藥組顆粒酶A、顆粒酶B與穿孔素表達(dá)均較荷瘤模型組顯著升高(p＜001），

5、而且Bcl-2蛋白表達(dá)量隨藥物劑量增大呈下降趨勢，Bax蛋白表達(dá)量隨藥物劑量增大呈上升趨勢，調(diào)整Bcl-2/Bax比值。
　　結(jié)論:XBFD具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，改善生存質(zhì)量，抑制H22肝癌細(xì)胞增殖的作用，其誘導(dǎo)凋亡途徑與顆粒酶/穿孔素參與的“非自愿細(xì)胞凋亡”及其增強(qiáng)Bax蛋白表達(dá)水平，降低Bcl-2蛋白表達(dá)水平有關(guān)，并且反映出XBFD對H22荷瘤小鼠的抑制作用有一定的量效關(guān)系。
　　抑瘤作用可能與以下機(jī)制有關(guān):