結(jié)直腸癌中RNF43基因突變的病理意義.pdf

1、結(jié)直腸癌是嚴(yán)重威脅人類健康的惡性消化道腫瘤之一，對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制以及防治策略的研究具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。在經(jīng)典的正常上皮-腺瘤-腺癌序列中Wnt通路激活是重要的早期環(huán)節(jié)，對(duì)Wnt通路信號(hào)強(qiáng)度調(diào)控的研究有助于闡明結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制。
　　環(huán)指蛋白43(Ring finger protein43，RNF43)是Wnt信號(hào)通路中重要的負(fù)向調(diào)控因子之一，具有清除細(xì)胞膜Wnt受體以及阻滯TCF4(T cell factor4)入核的功能

2、，在通路中發(fā)揮Wnt信號(hào)抑制作用。RNF43的異常表達(dá)、突變等改變對(duì)Wnt信號(hào)通路的活化程度有重大影響，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系，在臨床可能具有較為重要的意義。有研究報(bào)道RNF43的突變?cè)诟哳l微衛(wèi)星不穩(wěn)定(High-frequencymicrosatellite instability，MSI-H)的腫瘤中發(fā)生頻率較高，其突變情況與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性相關(guān)。RNF43的截短突變絕大多數(shù)發(fā)生在MSI-H情況下且與APC突變極少同時(shí)發(fā)生。這提示

3、RNF43功能缺失對(duì)Wnt通路激活程度的影響很可能是MSI類型結(jié)直腸癌發(fā)生機(jī)制中重要的一環(huán)，對(duì)其基因突變情況及微衛(wèi)星不穩(wěn)定情況的綜合分析可能有助于闡明其在臨床的功能效應(yīng)。對(duì)比在微衛(wèi)星穩(wěn)定/微衛(wèi)星不穩(wěn)定病例中RNF43基因的改變情況與臨床參數(shù)、預(yù)后之間的差異，有助于尋找新的預(yù)測(cè)標(biāo)志物、為個(gè)體化治療提供指導(dǎo)，具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值和理論意義。KRAS/BRAF的突變狀態(tài)與微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)均可以作為預(yù)測(cè)預(yù)后的指標(biāo)，且均與耐藥存在關(guān)聯(lián)，因此我們

4、還對(duì)其與KRAS/BRAF突變狀態(tài)的關(guān)聯(lián)進(jìn)行了分析，以深入探討RNF43對(duì)預(yù)后可能存在的效應(yīng)。
　　本次研究選取的446例散發(fā)性結(jié)直腸癌樣本均取自經(jīng)福爾馬林固定-石蠟包埋的患者手術(shù)切除組織。RNF43的基因外顯子區(qū)段存在多個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，根據(jù)RNF43突變與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的相關(guān)性推測(cè)，這些位點(diǎn)可能具有較高的突變率。因此我們先篩選出RNF43外顯子序列上存在的這些微衛(wèi)星位點(diǎn)并設(shè)計(jì)了針對(duì)性引物，在提取樣本基因組DNA后，用PCR方法對(duì)這

5、些微衛(wèi)星區(qū)段進(jìn)行擴(kuò)增，并使用Sanger測(cè)序方法對(duì)這些位點(diǎn)的突變情況進(jìn)行了檢測(cè)。之后我們運(yùn)用SPSS軟件(version20)分析了這些病例中RNF43突變與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性狀態(tài)、KRAS、BRAF等基因的突變情況（由本實(shí)驗(yàn)室在之前基于焦磷酸測(cè)序技術(shù)和多重?zé)晒釶CR-毛細(xì)管電泳的臨床分子檢測(cè)方法獲得）、患者的臨床病理學(xué)參數(shù)（性別、年齡、腫瘤部位、浸潤(rùn)深度、大體類型和組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期等）、預(yù)后生存數(shù)據(jù)等信息的相關(guān)

6、性。我們還對(duì)RNF43在腫瘤組織的表達(dá)做了免疫組化檢測(cè)，并分析了RNF43突變對(duì)其表達(dá)情況的影響。本次研究試圖闡明RNF43在結(jié)直腸癌人群中的突變情況，探討RNF43基因突變情況與上述各因素之間的聯(lián)系，分析這些改變情況與臨床參數(shù)的關(guān)聯(lián)及對(duì)預(yù)后的影響。
　　本次研究共發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌人群中存在p.Gly659fs、p.Arg117fs、c.350G＞A、c.816T＞C四種RNF43基因的突變，其總體突變頻率分別為9.2％、1.1％、5

7、4.5％、0.91％。p.Gly659fs在MSI-H狀態(tài)下的突變率為28.6％，在MSI-L/MSS狀態(tài)下的突變率為3.1％。 p.Arg117fs在MSI-H狀態(tài)下的突變率為3.6％，未在MSI-L/MSS狀態(tài)下發(fā)現(xiàn)此種突變。c.350G＞A的突變率在不同微衛(wèi)星狀態(tài)下未發(fā)現(xiàn)差異。發(fā)現(xiàn)p.Gly659fs與腫瘤部位（位于結(jié)腸、位于右半大腸）相關(guān)，與組織學(xué)類型（粘液腺癌）、組織學(xué)分化（低分化）相關(guān)，攜帶此突變的患者較少發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;c.

8、350G＞A與組織學(xué)類型（腺癌）、組織學(xué)分化（高分化）相關(guān)，這些相關(guān)性體現(xiàn)在此位點(diǎn)發(fā)生純合突變的情況下，而此位點(diǎn)發(fā)生雜合型突變時(shí)其各項(xiàng)臨床參數(shù)相比未突變組則均無(wú)差異。當(dāng)患者攜帶RNF43基因的p.Gly659fs突變時(shí)，再發(fā)生BRAF突變的患者五年生存率低于無(wú)BRAF突變者。暫未發(fā)現(xiàn)RNF43的突變與其在腫瘤組織的表達(dá)之間存在相關(guān)性。
　　本次研究目前可以得出以下結(jié)論:
　　1、RNF43在結(jié)直腸癌中突變率高。
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