五味子乙素治療非酒精性脂肪肝病藥效學(xué)和機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究五味子乙素(SchB)對(duì)非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的肝脂質(zhì)、轉(zhuǎn)氨酶、肝系數(shù)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路及脂肪酸合成相關(guān)基因表達(dá)的影響，探究五味子乙素對(duì)NAFLD的藥理作用及作用機(jī)理，為NAFLD的治療提供新的思路和方法。
　　方法：
　　一．建立非酒精性脂肪肝的ICR小鼠模型，將ICR雄性小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(A)、高脂模型組(B)、SchB低劑量組(C)、SchB中劑量組(D)、SchB高劑量組(E)、

2、非諾貝特(陽(yáng)性藥F)六組，A組飼喂普通飼料，其余各組飼喂高脂飼料，C、D、E組小鼠灌胃給予低、中、高劑量SchB，F(xiàn)組小鼠灌胃給予陽(yáng)性藥非諾貝特，飼養(yǎng)并灌胃一周后，處死小鼠。取小鼠肝臟，一部分做成肝臟勻漿，測(cè)定甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)含量和小鼠肝系數(shù)，一部分用甲醛固定，做肝臟病理切片。培養(yǎng)正常人L02細(xì)胞株，加入游離脂肪酸的混合物共培養(yǎng)24h誘導(dǎo)肝脂肪變性，建立NAFLD的細(xì)胞模型，

3、用不同濃度五味子乙素(SchB)干預(yù)模型，甘油三酯檢測(cè)試劑盒和流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)脂肪堆積情況。
　　二．提取細(xì)胞樣品、肝臟樣品的蛋白和總RNA，用Western Blotting檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路相關(guān)蛋白BIP、SREBP-1、PERK、P-PERK、P-eIF2α的變化，用RT-PCR檢測(cè)脂肪酸合成相關(guān)基因乙酰CoA羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶(GPAT)、硬脂酰CoA去飽和酶(S

4、CD)的變化。
　　結(jié)果：
　　體內(nèi)結(jié)果實(shí)驗(yàn)證實(shí)，與模型組相比，高、中、低劑量SchB劑量依賴性地降低肝臟TG含量；中、高濃度SchB均能顯著性降低CHO、AST、ALT含量；病理學(xué)檢測(cè)表明，與模型組小鼠相比，SchB作用組肝組織損傷較輕；肝系數(shù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，與陽(yáng)性藥相比，SchB的藥物毒性較小；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路蛋白BIP、SREBP-1、P-PERK、P-eIF2α在模型組中表達(dá)上調(diào)，SchB作用后表達(dá)下調(diào)；RT-PC

5、R檢測(cè)模型組脂肪酸合成相關(guān)基因ACC、FAS、GPAT表達(dá)上調(diào)，
　　而SCD表達(dá)下調(diào)，SchB作用后ACC、FAS、GPAT表達(dá)下調(diào)，而SCD表達(dá)上調(diào)。體外實(shí)驗(yàn)成功建立L02細(xì)胞脂肪堆積模型，流式細(xì)胞儀和甘油三酯檢測(cè)結(jié)果表明，與模型組相比，SchB組脂質(zhì)堆積顯著降低；蛋白和基因變化趨勢(shì)與體內(nèi)動(dòng)物模型變化相同。
　　結(jié)論：
　　SchB對(duì)體內(nèi)動(dòng)物NAFLD模型和體外細(xì)胞NAFLD模型具有治療效果，具有降脂降酶、逆轉(zhuǎn)肝臟