白藥子提取物成分鑒定及升白細胞實驗研究.pdf

1、白藥子作為防己科千金藤屬金線吊烏龜（Stephania cepharantha Hayata）的干燥塊根，是傳統(tǒng)中藥，分布于浙江、江蘇、安徽、福建、湖北等地。白藥子中生物堿含量豐富，主要為雙芐基異喹啉類，包括頭花千金藤堿、異粉防己堿、小檗胺、輪環(huán)藤寧堿、左旋異紫堇定、頭花千金藤醇靈堿、頭花千金藤胺等。雙芐基異喹啉類生物堿具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗輻射造成的白細胞減少、支氣管哮喘、抗腫瘤、逆轉(zhuǎn)多藥耐藥性、降血壓、抗心律失常、心肌保護等廣泛藥理

2、作用。而現(xiàn)在對白藥子生物堿提取物的制備及其活性的研究報道很少，限制了白藥子的開發(fā)應用。
　　本文從白藥子中提取生物堿，并對提取物進行成分鑒定，然后以白藥子提取物進行升白細胞的藥效學實驗，包括口服給藥和注射給藥的效果實驗，最后對其升白細胞的機制進行了初步探討。主要內(nèi)容有：
　?。?）白藥子提取物的制備
　　本研究以白藥子為材料，用pH梯度沉淀法和陽離子樹脂吸附法提取其中生物堿。用0.5％硫酸浸漬提取，將提取液分為2部分。

3、其中一部分用10%氨水依次調(diào)pH為5、7、9、11，分別離心收集各pH下的沉淀，依次水洗沉淀至無NH4+。沉淀的水懸液用乙酸乙酯萃取，回收溶劑后得不同pH下的生物堿。另一部分用陽離子樹脂吸附法得生物堿。取苯乙烯磺酸鈉型陽離子樹脂活化為H+型陽離子樹脂，裝柱后加入酸水提取液，調(diào)節(jié)適宜流速，讓樹脂充分吸附生物堿。用5倍柱體積蒸餾水洗樹脂，取出樹脂，自然干燥的樹脂放回提取燒瓶中，用10%氨水堿化為pH9，靜置20min，加二氯甲烷回流3次，合

4、并二氯甲烷液，用水洗至中性，無水硫酸鈉干燥，濾過，濾液揮干溶劑，得生物堿提取物。
　　結(jié)果，在pH為5，7，9，11的時候得到生物堿重量分別為0.396g，0.504g，1.654g，0.087g。陽離子樹脂法所得生物堿重0.450g。由此可見，用pH梯度沉淀法在pH9時所得生物堿的量最多，而樹脂吸附法最少。
　?。?）提取物成分鑒定
　　經(jīng)HPLC初步分析，采用p H梯度沉淀法在各pH下得到的提取物的色譜圖比較一致，

5、主要有三個色譜峰；而陽離子樹脂吸附法得到的提取物的色譜圖中除了含這三種生物堿的峰外，還有一些保留值相對很小的峰?？紤]到pH梯度沉淀法操作相對簡單，生物堿收率高，進一步對其中的成分進行了鑒定。用制備HPLC收集這3個峰，經(jīng)NMR、MS鑒定這3個峰分別為小檗胺、異粉防己堿、頭花千金藤堿。
　　對pH梯度沉淀法和陽離子樹脂吸附法所得提取物進行含量測定，結(jié)果pH梯度沉淀法在pH9時得到的生物堿總量(小檗胺、異粉防己堿、千金藤素合計)最高，

6、達到739.6mg/g(73.96%)，其中小檗胺、異粉防己堿、千金藤素含量分別為196.8mg/g、429.6mg/g、113.2mg/g。陽離子吸附樹脂法得到的生物堿提取物這三種生物堿含量分別為155.8mg/g、286.2mg/g、60.06mg/g，總量為502mg/g(50.2%)。所以白藥子中雙芐基異喹啉生物堿的提取方法可以總結(jié)為：0.5%硫酸冷浸，先用10%氨水調(diào)節(jié)pH5，分離棄去沉淀，然后將溶液pH調(diào)到9，分離得到沉淀，

7、沉淀懸浮于水用乙酸乙酯萃取，最后揮干有機溶劑得提取物。
　?。?）灌胃給藥升白細胞實驗研究
　　小鼠采用環(huán)磷酰胺(80mg/kg)腹腔注射3天造白細胞減少癥模型，白細胞總數(shù)明顯低于正常組即造模成功。然后灌胃給予低、中、高劑量的白藥子提取物(5、10、20mg/kg)和陽性對照藥地榆升白片(100mg/kg)治療6天。檢測外周血白細胞總數(shù)及分類計數(shù)，取脾臟、胸腺稱重并計算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。結(jié)果表明，白藥子提取物可以升高白細胞

8、總數(shù)及中性粒細胞數(shù)，且具有劑量依賴性，其中高劑量的提取物升白細胞作用比地榆升白片強。也可以升高脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。結(jié)論：白藥子提取物可以升高白細胞總數(shù)及中性粒細胞數(shù)，且效果好于陽性對照藥地榆升白片，對免疫器官有一定的保護作用。
　?。?）靜脈注射給藥升白細胞實驗研究
　　小鼠采用環(huán)磷酰胺(80mg/kg)腹腔注射3天造白細胞減少癥模型，然后靜脈注射低、中、高劑量的白藥子提取物(1.25、2.5、5mg/kg)治療7天。檢測外